| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 自交不亲和概述 | 第12-13页 |
| 1.2 芸薹属自交不亲和机制的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 芸薹属自交不亲和识别反应决定基因的鉴定 | 第13-14页 |
| 1.2.2 芸薹属自交不亲和S位点的显隐性关系 | 第14-15页 |
| 1.2.3 芸薹属自交不亲和信号传导下游基因的鉴定 | 第15-17页 |
| 1.2.4 芸薹属自交不亲信号传导路径 | 第17-18页 |
| 1.3 拟南芥自交不亲和性的研究 | 第18-19页 |
| 1.4 甘蓝型油菜中自交不亲和性的应用 | 第19-21页 |
| 1.5 自交不亲和基因的启动子研究 | 第21-24页 |
| 1.5.1 真核生物的启动子结构和分类 | 第21-22页 |
| 1.5.2 自交不亲和识别反应花粉决定基因SCR启动子的研究 | 第22-23页 |
| 1.5.3 甘蓝型油菜柱头特异表达基因启动子的研究 | 第23-24页 |
| 1.6 MYB转录因子在甘蓝型油菜中的研究 | 第24-25页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-52页 |
| 2.1 试验材料 | 第27页 |
| 2.2 质粒及生化试剂 | 第27-28页 |
| 2.3 研究方法 | 第28-52页 |
| 2.3.1 油菜和拟南芥DNA提取 | 第28页 |
| 2.3.2 PCR反应及片段的克隆、测序和质粒提取 | 第28-31页 |
| 2.3.3 油菜各组织与拟南芥花蕾总RNA的抽提及检测 | 第31-32页 |
| 2.3.4 RT-PCR及Realtime-PCR | 第32-33页 |
| 2.3.5 表达载体构建 | 第33-37页 |
| 2.3.6 农杆菌介导的植物遗传转化及阳性植株鉴定 | 第37-39页 |
| 2.3.7 GUS染色分析 | 第39-40页 |
| 2.3.8 花药半薄切片的制作 | 第40-41页 |
| 2.3.9 自交不亲和表型鉴定 | 第41-42页 |
| 2.3.10 花粉萌发观察 | 第42-43页 |
| 2.3.11 酵母文库的构建及筛库 | 第43-44页 |
| 2.3.12 拟南芥原生质体的转化 | 第44-45页 |
| 2.3.13 原生质体的瞬时表达 | 第45-47页 |
| 2.3.14 亚细胞定位 | 第47页 |
| 2.3.15 原核蛋白表达、纯化及检测 | 第47-51页 |
| 2.3.16 凝胶阻滞电泳(EMSA)方法 | 第51页 |
| 2.3.17 生物信息相关分析 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-78页 |
| 3.1 BnSCR1-BnSRK1-BnARC1在拟南芥中的功能保守性研究 | 第52-56页 |
| 3.1.1 转基因拟南芥植株的筛选 | 第52页 |
| 3.1.2 转基因拟南芥植株表型鉴定 | 第52-55页 |
| 3.1.3 转基因拟南芥BnSCR1、BnSRK1和BnARC1的表达分析 | 第55-56页 |
| 3.2 甘蓝型油菜自交不亲和柱头决定基因BnSRK1启动子分析 | 第56-58页 |
| 3.2.1 BnSRK1启动子的克隆 | 第56页 |
| 3.2.2 BnSRK1基因启动子的分析 | 第56-58页 |
| 3.3 甘蓝型油菜自交不亲和花粉决定基因SCR启动子分析 | 第58-62页 |
| 3.3.1 甘蓝型油菜自交不亲和基因BnSCR-1300和BnSCR-6动子分析 | 第58-60页 |
| 3.3.2 BnSCR1基因启动子表达模式进一步分析 | 第60-62页 |
| 3.4 甘蓝型油菜BnPHL2α基因的克隆和功能分析 | 第62-78页 |
| 3.4.1 酵母文库的构建及筛选 | 第62-65页 |
| 3.4.2 BnPHL2α与BnSCR1启动子互作区域的进一步鉴定 | 第65-67页 |
| 3.4.3 BnPHL2α的亚细胞定位 | 第67-68页 |
| 3.4.4 BnPHL2α基因的表达检测 | 第68页 |
| 3.4.5 BnPHL2α的转录激活/抑制分析 | 第68-69页 |
| 3.4.6 BnPHL2α的转录激活/抑制区域分析 | 第69-71页 |
| 3.4.7 原生质体瞬时转化检测BnPHL2α对P342启动子活性的调控 | 第71页 |
| 3.4.8 BnPHL2α蛋白的表达与纯化 | 第71-72页 |
| 3.4.9 凝胶阻滞实验体外验证BnPHL2α与BnSCR1基因启动子的结合 | 第72-74页 |
| 3.4.10 BnPHL2α基因的功能验证 | 第74-78页 |
| 3.4.10.1 运用CRISPR技术研究BnPHL2α的功能 | 第74页 |
| 3.4.10.2 BnPHL2α转基因植株检测与分析 | 第74-78页 |
| 4 讨论 | 第78-85页 |
| 4.1 转基因拟南芥自交不亲和信号传导通路探讨 | 第78-80页 |
| 4.2 甘蓝型油菜SCR1基因的启动子调控探讨 | 第80页 |
| 4.3 BnSRK1基因的启动子序列分析与探讨 | 第80-81页 |
| 4.4 SCR与花粉外被蛋白的研究 | 第81-82页 |
| 4.5 BnPHL2α与MYB家族转录因子 | 第82页 |
| 4.6 BnPHL2α在甘蓝型油菜中的功能探讨 | 第82-83页 |
| 4.7 总结和展望 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-100页 |
| 附录1 引物序列 | 第100-105页 |
| 附录2 BnSRK1、BnSCR-1300和BnSCR-6基因启动子序列 | 第105-108页 |
| 附录3 BnSCR-1300 和 BnSCR-6 基因启动子序列 | 第108-110页 |
| 附录4 BnPHL2α 与其同源拷贝的核苷酸序列比对结果 | 第110-111页 |
| 附录5 作者简介 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
