| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-35页 |
| 1.1 鸭坦布苏病毒 | 第16-24页 |
| 1.1.1 DTMUV的命名 | 第16页 |
| 1.1.2 病原学 | 第16-18页 |
| 1.1.3 主要编码的蛋白及其主要功能 | 第18-19页 |
| 1.1.4 细胞中的复制 | 第19-20页 |
| 1.1.5 理化培养特性 | 第20页 |
| 1.1.6 哺乳动物感染研究 | 第20-21页 |
| 1.1.7 诊断 | 第21-23页 |
| 1.1.8 防控 | 第23-24页 |
| 1.2 蛋白质组学技术及应用 | 第24-28页 |
| 1.2.1 蛋白质组学技术在病毒学研究中的应用 | 第25-26页 |
| 1.2.2 同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)技术 | 第26-28页 |
| 1.3 抗病毒天然免疫 | 第28-35页 |
| 1.3.1 TLRs介导的抗病毒天然免疫 | 第29-30页 |
| 1.3.2 RLRs介导的抗病毒天然免疫 | 第30-33页 |
| 1.3.3 DEAD-box RNA解旋酶家族与抗病毒免疫反应 | 第33-35页 |
| 第2章 研究的目的与意义 | 第35-36页 |
| 第3章 鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞的蛋白质组学分析 | 第36-66页 |
| 3.1 材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 细胞及毒株 | 第36页 |
| 3.1.2 抗体 | 第36页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.4 引物 | 第37页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 3.1.6 主要分析软件 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-49页 |
| 3.2.1 细胞培养基及常用试剂的配制 | 第38页 |
| 3.2.2 细胞的复苏与传代培养 | 第38-39页 |
| 3.2.3 DTMUV的细胞接种 | 第39-40页 |
| 3.2.4 DTMUV半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定 | 第40页 |
| 3.2.5 用于蛋白质组学分析的细胞样品制备 | 第40-41页 |
| 3.2.6 全细胞蛋白质的提取 | 第41页 |
| 3.2.7 蛋白定量 | 第41-42页 |
| 3.2.8 蛋白还原烷基化及酶解 | 第42页 |
| 3.2.9 肽段的iTRAQ8 plex试剂标记 | 第42-43页 |
| 3.2.10 2D-LC-MS/MS分析 | 第43-44页 |
| 3.2.11 蛋白的鉴定与生物信息学分析 | 第44-45页 |
| 3.2.12 RNA的提取、反转录及荧光定量qRT-PCR | 第45-47页 |
| 3.2.13 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot实验 | 第47-49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-62页 |
| 3.3.1 DTMUV感染BHK-21细胞的增殖特性 | 第49-51页 |
| 3.3.2 不同时间点差异表达蛋白的鉴定 | 第51-53页 |
| 3.3.3 差异表达蛋白的功能注释 | 第53-58页 |
| 3.3.4 DTMUV感染后48h差异表达蛋白的IPA互作网络分析 | 第58-60页 |
| 3.3.5 差异表达蛋白的荧光定量qRT-PCR验证 | 第60-61页 |
| 3.3.6 差异表达蛋白的Western blot验证 | 第61-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-66页 |
| 3.4.1 DTMUV感染BHK-21细胞后24h和48h差异表达蛋白的比较 | 第62-63页 |
| 3.4.2 TLR9 | 第63-64页 |
| 3.4.3 MAVS | 第64页 |
| 3.4.4 DEAD-box RNA解旋酶家族成员蛋白 | 第64-65页 |
| 3.4.5 MMP-2 | 第65页 |
| 3.4.6 热休克蛋白 | 第65-66页 |
| 第4章 DDX3X对鸭坦布苏病毒复制的影响 | 第66-91页 |
| 4.1 材料 | 第66-69页 |
| 4.1.1 细胞及毒株 | 第66页 |
| 4.1.2 质粒 | 第66页 |
| 4.1.3 抗体 | 第66-67页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第67-68页 |
| 4.1.5 引物及siRNA | 第68页 |
| 4.1.6 主要仪器设备 | 第68-69页 |
| 4.2 方法 | 第69-80页 |
| 4.2.1 细胞培养基及常用试剂的配制 | 第69页 |
| 4.2.2 细胞的复苏与传代培养 | 第69页 |
| 4.2.3 VSV-GFP的增殖 | 第69页 |
| 4.2.4 RNA的提取、反转录及荧光定量qRT-PCR | 第69-70页 |
| 4.2.5 3Flag-DDX3X真核表达质粒的构建与质粒提取 | 第70-75页 |
| 4.2.6 细菌的保存 | 第75页 |
| 4.2.7 去内毒素提取质粒 | 第75-77页 |
| 4.2.8 Lipofectamine~(TM) 2000 Reagent转染细胞 | 第77页 |
| 4.2.9 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western blot实验 | 第77-78页 |
| 4.2.10 DTMUV的细胞接种及TCID_(50)的测定 | 第78页 |
| 4.2.11 荧光显微镜观察 | 第78页 |
| 4.2.12 流式细胞仪计数 | 第78-79页 |
| 4.2.13 免疫共沉淀实验 | 第79-80页 |
| 4.2.14 干扰素启动子活性实验 | 第80页 |
| 4.3 结果与分析 | 第80-90页 |
| 4.3.1 DDX3X真核表达质粒的成功构建 | 第80-83页 |
| 4.3.2 DDX3X真核表达质粒在细胞内成功表达 | 第83页 |
| 4.3.3 DDX3X对DTMUV复制的影响 | 第83-85页 |
| 4.3.4 BHK-21细胞的干扰素通路的验证 | 第85-86页 |
| 4.3.5 DDX3X对干扰素及下游基因表达的影响 | 第86-90页 |
| 4.4 讨论 | 第90-91页 |
| 第5章 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 附录 | 第107-115页 |
| 个人简介 | 第115-117页 |
