| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 荧光素酶的催化发光原理与应用 | 第9-12页 |
| 1.1.1 荧光素酶的催化发光原理 | 第9-10页 |
| 1.1.2 荧光素酶的应用 | 第10-12页 |
| 1.2 荧光素酶的分子结构与基因工程研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 荧光素酶的分子结构 | 第12-13页 |
| 1.2.2 萤火虫荧光素酶的研究进展 | 第13页 |
| 1.2.3 北美萤火虫荧光素酶的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 稳定剂对荧光素酶活力的影响 | 第14-16页 |
| 1.3.1 稳定剂的种类及作用原理 | 第14-15页 |
| 1.3.2 荧光素酶稳定剂应用的研究 | 第15-16页 |
| 1.4 萤火虫荧光素酶的分子改造 | 第16-17页 |
| 1.5 课题研究意义和内容 | 第17-19页 |
| 1.5.1 课题的研究意义 | 第17页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第17-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 扩增序列所用PCR引物 | 第20-22页 |
| 2.1.5 培养基及试剂的配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备及转化 | 第22-23页 |
| 2.2.2 荧光素酶突变体质粒的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.3 重组质粒pMA0911-luc/luc1.1的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.4 枯草芽孢杆菌表达荧光素酶的菌株构建 | 第27-28页 |
| 2.2.5 重组荧光素酶的获取与纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 重组荧光素酶催化活力与催化发光的发射波长测定 | 第29页 |
| 2.2.7 重组荧光素酶的性质研究 | 第29-30页 |
| 2.2.8 重组荧光素酶与市售荧光素酶的酶活比较 | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-48页 |
| 3.1 荧光素酶突变体Luc1.1的构建及酶活测定 | 第31-36页 |
| 3.1.1 荧光素酶突变体Luc1.1的构建 | 第31页 |
| 3.1.2 突变型Luc1.1与野生型Luc的纯化及酶活比较 | 第31-36页 |
| 3.2 枯草芽孢杆菌重组菌的构建及酶活测定 | 第36-40页 |
| 3.2.1 重组质粒pMA0911-luc/luc1.1的构建 | 第36-39页 |
| 3.2.2 枯草芽孢杆菌中表达Luc及Luc1.1的纯化及酶活测定 | 第39-40页 |
| 3.3 荧光素酶单点饱和突变体的构建及酶活力比较 | 第40-44页 |
| 3.3.1 荧光素酶单点饱和突变体的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.2 荧光素酶单点氨基酸残基饱和突变体的纯化及酶活测定 | 第41-44页 |
| 3.4 实验构建重组荧光素酶与商品荧光素酶的酶活比较 | 第44页 |
| 3.5 稳定剂对荧光素酶Luc1.2发光稳定作用和增强作用的研究 | 第44-48页 |
| 3.5.1 稳定剂对突变型Luc1.2催化发光作用的增强效果研究 | 第44-46页 |
| 3.5.2 稳定剂对突变型Luc1.2发光稳定作用的研究 | 第46-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第48-49页 |
| 展望 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
