| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 L-丙氨酸的性质及功能应用 | 第10-11页 |
| 1.1.1 L-丙氨酸的结构及其性质 | 第10页 |
| 1.1.2 L-丙氨酸的功能及应用 | 第10-11页 |
| 1.2 天冬氨酸β-脱羧酶研究概况 | 第11-13页 |
| 1.2.1 L-天冬氨酸β-脱羧酶的功能 | 第11页 |
| 1.2.2 L-天冬氨酸β-脱羧酶的性质研究 | 第11-13页 |
| 1.2.3 改造L-天冬氨酸β-脱羧酶的研究现状 | 第13页 |
| 1.3 L-丙氨酸的制备 | 第13-14页 |
| 1.3.1 化学合成法 | 第13-14页 |
| 1.3.2 酶催化法 | 第14页 |
| 1.4 L-丙氨酸生产的国内外研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4.1 L-丙氨酸生产的国外研究进展 | 第14页 |
| 1.4.2 L-丙氨酸生产的国内研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 论文研究内容 | 第15-17页 |
| 1.5.1 论文立题背景和研究意义 | 第15-16页 |
| 1.5.2 论文研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 引物 | 第17-18页 |
| 2.1.3 培养基与培养条件 | 第18-19页 |
| 2.1.4 主要实验试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 相关试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-26页 |
| 2.2.1 目的基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.2 E.coli感受态细胞的制备和转化方法 | 第21页 |
| 2.2.3 重组质粒和重组菌的构建 | 第21页 |
| 2.2.4 L-天冬氨酸β-脱羧酶的表达及酶活分析 | 第21-22页 |
| 2.2.5 提高目标蛋白可溶性表达研究 | 第22-23页 |
| 2.2.6 L-天冬氨酸β-脱羧酶的纯化及酶学性质分析 | 第23-24页 |
| 2.2.7 重组质粒提取 | 第24页 |
| 2.2.8 突变株的构建 | 第24页 |
| 2.2.9 重组菌全细胞转化生成L-丙氨酸 | 第24-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-42页 |
| 3.1 重组菌E.coli/pET28a-aspD的构建 | 第26-28页 |
| 3.1.1 P.dacunhaeL-天冬氨酸β-脱羧酶基因aspD的克隆 | 第26页 |
| 3.1.2 重组菌E.coli/pET28a-aspD的构建 | 第26-27页 |
| 3.1.3 L-天冬氨酸β-脱羧酶的表达 | 第27页 |
| 3.1.4 提高L-天冬氨酸β-脱羧酶可溶性表达 | 第27-28页 |
| 3.2 L-天冬氨酸β-脱羧酶的纯化及酶学性质研究 | 第28-31页 |
| 3.2.1 L-天冬氨酸β-脱羧酶的纯化 | 第28页 |
| 3.2.2 温度对L-天冬氨酸β-脱羧酶酶活和稳定性的影响 | 第28-29页 |
| 3.2.3 pH对L-天冬氨酸β-脱羧酶酶活和稳定性的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.4 金属离子及EDTA对重组L-天冬氨酸β-脱羧酶的影响 | 第30页 |
| 3.2.5 L-天冬氨酸β-脱羧酶催化合成L-丙氨酸 | 第30-31页 |
| 3.3 突变位点的选择 | 第31-33页 |
| 3.4 单点突变对L-天冬氨酸β-脱羧酶酶活和pH耐受性的影响 | 第33-36页 |
| 3.4.1 单点突变重组质粒的构建与转化 | 第33页 |
| 3.4.2 单点突变重组蛋白的表达与酶活测定 | 第33-34页 |
| 3.4.3 单点突变体酶的最适温度与温度稳定性 | 第34-35页 |
| 3.4.4 单点突变体酶的最适pH与pH稳定性 | 第35-36页 |
| 3.5 组合突变对L-天冬氨酸β-脱羧酶酶活和pH耐受性的影响 | 第36-37页 |
| 3.6 突变株N34D/L484M全细胞转化的条件优化 | 第37-42页 |
| 3.6.1 E.coli/pET28a-aspD转化生成L-丙氨酸的初步验证 | 第37页 |
| 3.6.2 转化温度的优化 | 第37-38页 |
| 3.6.3 转化pH的优化 | 第38-39页 |
| 3.6.4 缓冲液浓度的优化 | 第39-40页 |
| 3.6.5 N34D/L484M全细胞转化生成L-丙氨酸 | 第40页 |
| 3.6.6 突变株N34D/L484M5L发酵罐放大实验 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位论文期间发表的论文 | 第49页 |
