| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-30页 |
| 1.1 基因编辑的发展史 | 第12-20页 |
| 1.2 基因治疗研究进展 | 第20-24页 |
| 1.3 动物模型在基因治疗中的必要性 | 第24-29页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第29-30页 |
| 第2章 材料与方法 | 第30-56页 |
| 2.1 实验动物 | 第30页 |
| 2.2 MITF基因修复质粒的设计与构建 | 第30-32页 |
| 2.2.1 实验材料、仪器与试剂 | 第30页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3 MITF基因修复质粒修复效率验证 | 第32-35页 |
| 2.3.1 实验材料、仪器与试剂 | 第32-33页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 2.4 MITF突变修复单克隆细胞筛选 | 第35-42页 |
| 2.4.1 实验材料、仪器与试剂 | 第35-38页 |
| 2.4.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.5 体细胞核移植 | 第42-46页 |
| 2.5.1 实验材料、仪器与试剂 | 第42-45页 |
| 2.5.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 2.6 胚胎移植 | 第46-48页 |
| 2.6.1 实验材料、仪器与试剂 | 第46-47页 |
| 2.6.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 2.7 MITF基因修复猪基因型鉴定 | 第48-50页 |
| 2.7.1 实验材料、仪器与试剂 | 第48-49页 |
| 2.7.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 2.8 组织石蜡切片及HE染色 | 第50-51页 |
| 2.8.1 实验材料、仪器与试剂 | 第50页 |
| 2.8.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 2.9 光学相干断层扫描(OCT) | 第51页 |
| 2.9.1 实验材料、仪器与试剂 | 第51页 |
| 2.9.2 实验方法 | 第51页 |
| 2.10 视网膜电图(ERG)与眼底照相 | 第51-54页 |
| 2.10.1 实验材料、仪器与试剂 | 第51页 |
| 2.10.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 2.11 免疫荧光 | 第54-56页 |
| 2.11.1 实验材料、仪器与试剂 | 第54页 |
| 2.11.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 第3章 结果 | 第56-70页 |
| 3.1 成功分离培养眼睛发育缺陷猪胎儿成纤维细胞系 | 第56-57页 |
| 3.2 具有MITF基因修复作用的质粒构建成功 | 第57-60页 |
| 3.2.1 体外酶切实验获取sgRNA靶向效率 | 第57-58页 |
| 3.2.2 分子克隆获得MITF-sgRNA-PX330打靶质粒 | 第58-60页 |
| 3.3 获得MITF单等位基因修复的单克隆细胞系 | 第60-61页 |
| 3.4 体细胞核移植与胚胎移植获得怀孕母猪 | 第61-62页 |
| 3.5 MITF基因修复克隆猪出生 | 第62-64页 |
| 3.6 HE染色显示修复克隆猪的眼睛结构正常 | 第64页 |
| 3.7 OCT结果显示修复克隆猪视网膜与角膜结构正常 | 第64-66页 |
| 3.8 眼底照相显示克隆猪眼底正常 | 第66页 |
| 3.9 免疫荧光显示修复克隆猪RPE细胞分布及功能正常 | 第66-67页 |
| 3.10 ERG结果显示基因修复猪眼睛具有正常电生理功能 | 第67-70页 |
| 第4章 讨论 | 第70-72页 |
| 第5章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72页 |
| 5.2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 在读期间发表的论文及研究成果 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
