| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-15页 |
| 1 酸浆的研究进展 | 第9页 |
| 1.1 酸浆的概述 | 第9页 |
| 1.2 酸浆生物活性 | 第9页 |
| 2 皂苷的研究进展 | 第9-12页 |
| 2.1 皂苷的概述 | 第9-10页 |
| 2.2 皂苷的生物活性 | 第10-12页 |
| 2.2.1 抗炎活性 | 第10页 |
| 2.2.2 降血脂活性 | 第10-11页 |
| 2.2.3 抗菌和抗病毒活性 | 第11页 |
| 2.2.4 抗肿瘤活性 | 第11-12页 |
| 2.3 皂苷潜在的负面影响 | 第12页 |
| 3 细胞凋亡 | 第12-13页 |
| 4 本课题研究的目的和意义 | 第13-14页 |
| 5 技术路线 | 第14-15页 |
| 第一章 酸浆宿萼总皂苷对SMMC-7721肝癌细胞增殖抑制的作用 | 第15-25页 |
| 1 实验材料 | 第15-17页 |
| 1.1 实验细胞 | 第15页 |
| 1.2 主要试剂及材料 | 第15页 |
| 1.3 主要仪器 | 第15-16页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-19页 |
| 2.1 SMMC-7721肝癌细胞培养 | 第17-18页 |
| 2.1.1 SMMC-7721肝癌细胞的复苏 | 第17页 |
| 2.1.2 SMMC-7721肝癌细胞的传代 | 第17页 |
| 2.1.3 SMMC-7721肝癌细胞的计数 | 第17页 |
| 2.1.4 SMMC-7721肝癌细胞的冻存 | 第17-18页 |
| 2.2 MTT实验 | 第18页 |
| 2.3 Annexin V-EGFP实验 | 第18-19页 |
| 3 实验结果 | 第19-24页 |
| 3.1 TSP不同时间对SMMC-7721肝癌细胞活力的抑制 | 第19-22页 |
| 3.1.1 TSP作用24h对SMMC-7721肝癌细胞活力的抑制 | 第19-20页 |
| 3.1.2 TSP作用48h对SMMC细胞活力的影响 | 第20-21页 |
| 3.1.3 TSP作用72h对SMMC细胞活力的影响 | 第21-22页 |
| 3.2 TSP诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡 | 第22-24页 |
| 3.2.1 TSP诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡 | 第22-23页 |
| 3.2.2 TSP作用不同时间对SMMC细胞凋亡的影响 | 第23-24页 |
| 4 结论 | 第24-25页 |
| 第二章 酸浆宿萼总皂苷对人肝癌细胞生长的抑制相关基因表达的作用 | 第25-41页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1 实验细胞 | 第25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-30页 |
| 2.1 实验细胞的分组与处理 | 第26页 |
| 2.2 RNA的提取与纯度鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.1 RNA提取前实验耗材预处理 | 第26-27页 |
| 2.2.2 RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.3 RNA浓度分析 | 第27页 |
| 2.2.4 RNA纯度分析 | 第27页 |
| 2.3 聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第27-30页 |
| 2.3.1 反转录反应 | 第27-28页 |
| 2.3.2 反转录的PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.3 数据处理与分析 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-40页 |
| 3.1 RNA纯度及浓度的检测 | 第30页 |
| 3.2 普通PCR电泳验证目的基因的片段 | 第30-31页 |
| 3.3 荧光定量PCR检测结果 | 第31-35页 |
| 3.3.1 目的基因标准曲线的建立 | 第31-33页 |
| 3.3.2 目的基因的扩增动力学和熔解曲线 | 第33-35页 |
| 3.4 TSP对SMMC细胞中目的基因mRNA活性的影响 | 第35-40页 |
| 3.4.1 TSP对apaf-1基因mRNA表达量的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.2 TSP对caspase-9基因mRNA表达量的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.3 TSP对caspase-3基因mRNA表达量的影响 | 第37-38页 |
| 3.4.4 TSP对细胞色素CmRNA表达量的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.5 TSP对p53基因mRNA表达量的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.6 TSP对Bax基因mRNA表达的影响 | 第40页 |
| 4 结论 | 第40-41页 |
| 第三章 TSP对SMMC-7721肝癌细胞增殖抑制相关蛋白活性的变化 | 第41-49页 |
| 1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.1 实验细胞 | 第41页 |
| 1.2 主要试剂 | 第41-42页 |
| 1.3 实验仪器 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-45页 |
| 2.1 实验细胞的分组与处理 | 第42页 |
| 2.2 细胞总蛋白的提取与浓度测定 | 第42-43页 |
| 2.2.1 细胞总蛋白的提取 | 第42页 |
| 2.2.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第42页 |
| 2.2.3 蛋白样品的处理 | 第42-43页 |
| 2.3 所提蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第43页 |
| 2.4 Western Blot | 第43-45页 |
| 2.4.1 Western Blot试剂的配制 | 第43页 |
| 2.4.2 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第43-44页 |
| 2.4.3 转膜 | 第44页 |
| 2.4.4 免疫反应 | 第44-45页 |
| 2.4.5 显色与曝光 | 第45页 |
| 2.4.6 数据分析 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| 3.1 BCA蛋白浓度测定结果 | 第45-46页 |
| 3.2 蛋白免疫印迹结果 | 第46-48页 |
| 3.2.1 caspase-3蛋白表达量 | 第46-47页 |
| 3.2.2 细胞色素C蛋白表达量 | 第47-48页 |
| 4 结论 | 第48-49页 |
| 全文讨论与结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| Abstract | 第56-57页 |
| 致谢 | 第58页 |
