| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-12页 |
| 综述 | 第12-29页 |
| 1 猪圆环病毒Ⅰ型和Ⅱ型的概述 | 第12-17页 |
| 1.1 病原学 | 第12页 |
| 1.2 病毒流行病学 | 第12-13页 |
| 1.3 PCV相关疾病及症状 | 第13-14页 |
| 1.4 PCV诊断方法 | 第14-16页 |
| 1.5 PCV的防治手段 | 第16-17页 |
| 2 杆状病毒表达系统概述 | 第17-20页 |
| 2.1 杆状病毒 | 第17页 |
| 2.2 杆状病毒表达系统的构成 | 第17-18页 |
| 2.3 杆状病毒表达系统的特点 | 第18页 |
| 2.4 重组杆状病毒的构建方法 | 第18页 |
| 2.5 外源蛋白表达的影响因素 | 第18-19页 |
| 2.6 昆虫杆状病毒表达系统的应用与展望 | 第19-20页 |
| 3 研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-29页 |
| 第一章 猪圆环病毒1型的分离与鉴定 | 第29-45页 |
| 摘要 | 第29页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| 1.1 病料、细胞和病毒 | 第29-30页 |
| 1.2 分子生物学试剂 | 第30页 |
| 1.3 其他试剂 | 第30页 |
| 1.4 细胞培养用生长液 | 第30页 |
| 1.5 主要仪器 | 第30页 |
| 1.6 实验所用溶液的配制 | 第30-31页 |
| 1.7 分子生物学软件 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-36页 |
| 2.1 血液组织样品的采集与处理 | 第32页 |
| 2.2 病毒DNA的提取 | 第32页 |
| 2.3 血清或组织样品中PCV1特异性基因片段的扩增 | 第32-33页 |
| 2.4 病毒的分离和鉴定 | 第33页 |
| 2.5 PCV1全基因组的扩增及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.6 DNA片段的纯化回收及连接转化 | 第34-35页 |
| 2.7 重组质粒的PCR鉴定和酶切鉴定及测序 | 第35页 |
| 2.8 间接免疫荧光试验 | 第35-36页 |
| 2.9 序列分析 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-42页 |
| 3.1 猪场及屠宰场370份样品的PCR鉴定结果 | 第36页 |
| 3.2 病毒的分离和鉴定结果 | 第36-37页 |
| 3.3 病毒全基因组的扩增及鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 间接免疫荧光试验测定结果 | 第38页 |
| 3.5 病毒基因组全长序列测定结果 | 第38-39页 |
| 3.6 病毒序列分析 | 第39-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-45页 |
| 第二章 猪圆环病毒1型ORF2基因在真核系统和原核系统中的表达及单克隆抗体的制备 | 第45-81页 |
| 摘要 | 第45-46页 |
| 1 材料 | 第46-51页 |
| 1.1 病毒毒株、细胞系以及实验动物 | 第46页 |
| 1.2 菌株及载体 | 第46页 |
| 1.3 主要试剂 | 第46-48页 |
| 1.4 主要设备仪器 | 第48页 |
| 1.5 实验所用溶液的配制 | 第48-51页 |
| 1.6 透析袋的处理 | 第51页 |
| 1.7 器械及器皿 | 第51页 |
| 1.8 分子生物学软件 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-61页 |
| 2.1 病毒DNA的提取 | 第51页 |
| 2.2 引物设计与合成及目的基因的获得 | 第51-52页 |
| 2.3 DNA片段的纯化回收及连接转化 | 第52页 |
| 2.4 重组质粒的PCR鉴定和酶切鉴定及测序 | 第52-53页 |
| 2.5 重组质粒Bacmid-PCV1-ORF2及pET-PCV1-去核ORF2的构建 | 第53-55页 |
| 2.6 重组杆状病毒的获得 | 第55-58页 |
| 2.7 免疫原的制备 | 第58-59页 |
| 2.8 免疫原的分析鉴定 | 第59-61页 |
| 3 单克隆抗体的制备 | 第61-64页 |
| 3.1 动物免疫 | 第61页 |
| 3.2 最佳抗原包被浓度和抗体稀释度的确定 | 第61页 |
| 3.3 细胞融合试验 | 第61-62页 |
| 3.4 阳性克隆的筛选方法 | 第62页 |
| 3.5 阳性杂交瘤细胞的克隆化及定株 | 第62-63页 |
| 3.6 杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第63页 |
| 3.7 腹水的制备 | 第63页 |
| 3.8 单抗特性鉴定 | 第63-64页 |
| 4 结果 | 第64-79页 |
| 4.1 PCV1 ORF2基因及PCV1 ORF2去核定位信号肽基因的获得 | 第64-65页 |
| 4.2 重组质粒pMD18-T-ORF2及pMD18-T-去核ORF2酶切鉴定 | 第65-66页 |
| 4.3 重组质粒pFastBac~(TM)-1-PCV1-ORF2的鉴定 | 第66-67页 |
| 4.4 重组质粒Bacmid-PCV1-ORF2及pET-PCV1-去核ORF2的鉴定 | 第67-69页 |
| 4.5 重组穿梭载体Bacmid-PCV1-ORF2转染昆虫细胞的病变情况 | 第69-70页 |
| 4.6 重组杆状病毒(reBacmid-PCV1-Cap)和野生型杆状病毒(wt.Ac)的鉴定结果 | 第70-72页 |
| 4.7 重组杆状病毒(reBacmid-PCV1-Cap)浓缩后的TCID_(50)计算结果 | 第72-73页 |
| 4.8 SDS-PAGE及Western-Blot的鉴定结果 | 第73-75页 |
| 4.9 杂交痛细胞株的建立 | 第75-76页 |
| 4.10 单克隆抗体特性的鉴定 | 第76-79页 |
| 5 讨论 | 第79-81页 |
| 全文小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
