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若羌县原始胡杨林胡杨内生细菌多样性分析及一株新种的多相分类学鉴定

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
目录第9-13页
第一章 文献综述第13-29页
    1 胡杨概述第14-17页
        1.1 胡杨特征第14页
        1.2 胡杨林的生态分布第14-15页
        1.3 胡杨树杆内存液第15-16页
        1.4 胡杨微生物多样性国内外研究进展第16-17页
    2 植物内生菌第17-21页
        2.1 植物内生菌的定义第17页
        2.2 植物内生细菌功能多样性第17-19页
        2.3 植物内生菌的应用第19-21页
            2.3.1 促生长作用第19页
            2.3.2 固氮作用第19-20页
            2.3.3 生物防治作用第20页
            2.3.4 生物修复作用第20-21页
    3 植物内生菌群落多样性分析方法第21-23页
        3.1 可培养分析群落结构多样性法(传统培养方法)第21页
        3.2 分子生物学方法第21-22页
        3.3 454 高通量测序法第22-23页
        3.4 生物化学方法第23页
        3.5 生物标记(Biomarker)法第23页
    4 对潜在新种的多相分类学研究方法第23-27页
        4.1 表型特征分析法第24-25页
            4.1.1 表达特征第24页
            4.1.2 生理生化特征第24页
            4.1.3 化学分类特征第24-25页
        4.2 遗传学特征分析法第25-26页
            4.2.1 16S rRNA 基因序列分析第25页
            4.2.2 DNA G+C 含量分析第25页
            4.2.3 DNA-DNA 同源性分析第25-26页
        4.3 系统发育分析法第26-27页
    5 研究目的与研究内容第27-28页
        5.1 研究目的第27页
        5.2 研究内容第27-28页
    6 技术路线第28-29页
第二章 研究若羌县原始胡杨内生可培养细菌的多样性第29-60页
    1 实验材料第29-31页
        1.1 采样位点第29-30页
        1.2 采集样品第30页
            1.2.1 样品特征第30页
            1.2.2 样品预处理第30页
        1.3 实验试剂第30-31页
        1.4 实验仪器第31页
        1.5 引物第31页
        1.6 测序第31页
    2 实验方法第31-37页
        2.1 培养基的配制第31-32页
        2.2 涂布样品第32页
        2.3 菌落形成单位(CFU 值)的计算第32-33页
        2.4 菌株的初步筛选与纯化第33页
        2.5 细胞的形态观察第33-35页
            2.5.1 简单染色第33页
            2.5.2 革兰氏染色第33-34页
            2.5.3 快速革兰氏染色(KOH-Test)第34-35页
        2.6 细菌的分子遗传学分析第35-37页
            2.6.1 裂解液法提取细菌基因组 DNA (方法一)第35页
            2.6.2 煮沸法(方法二)第35-36页
            2.6.3 16S rRNA 基因扩增第36页
            2.6.4 PCR 产物的检测及测序第36页
            2.6.5 16S rRNA 基因序列测定及系统发育分析第36-37页
            2.6.6 培养基优势度的计算第37页
    3 结果第37-57页
        3.1 内生细菌的分离、纯化与菌株的计数第37页
        3.2 表型结果第37-41页
        3.3 培养基的分离效果第41-42页
        3.4 基于 16S rRNA 基因序列基础上的细菌多样性分析第42-52页
            3.4.1 总分离菌的 16S rRNA 基因序列相似性分析第42-51页
            3.4.2 胡杨潜在内生细菌第51-52页
        3.5 可培养内生细菌的系统进化分析第52-57页
            3.5.1 若羌县原始胡杨林分离的胡杨内生细菌总进化树第52-54页
            3.5.2 所分离菌株按其分类类群来建立系统进化树第54-57页
    4 讨论第57-60页
第三章 利用 454 高通量测序技术对若羌县原始胡杨林胡杨内生细菌的多样性的初步研究第60-98页
    1 实验材料第60-61页
        1.1 采样位点与内存液的采集第60页
        1.2 主要试剂及实验仪器第60-61页
            1.2.1 生化试剂第60页
            1.2.2 实验仪器第60-61页
    2 实验方法第61-69页
        2.1 样品的预处理第61页
        2.2 内存液基因组总 DNA 的提取第61-62页
        2.3 设计并合成引物接头第62页
        2.4 细菌 16S rRNA 基因扩增第62-63页
        2.5 荧光定量第63页
        2.6 emPCR第63-64页
        2.7 Roche Genome Sequencer FLX +上机测序第64页
        2.8 标准生物信息学分析第64-66页
            2.8.1 有效测序序列统计第64页
            2.8.2 优质序列统计第64-65页
            2.8.3 OTU 聚类分析第65-66页
        2.9 多样性指数(Alpha-diversity)第66-68页
        2.10 稀释性曲线(Rarefaction curve)第68页
        2.11 分类学分析(Taxonomy)第68-69页
    3 454 高通量分析总路线第69页
    4 结果与分析第69-95页
        4.1 内存液总 DNA 的提取及纯化第69-70页
        4.2 细菌 16S rRNA 基因扩增第70页
        4.3 细菌 16S rRNA 基因测序第70-71页
        4.4 16S rRNA 基因序列的标准生物信息学分析第71-78页
            4.4.1 有效序列和优质序列分析第71页
            4.4.2 OTU 聚类第71-74页
            4.4.3 多样性指数分析(Alpha-diversity)第74-76页
            4.4.4 稀释曲线(rarefaction)分析第76页
            4.4.5 Rank_Abuance Curve(丰富度曲线)分析第76-77页
            4.4.6 Shannon 多样性指数曲线第77-78页
        4.5 分类学(Taxonomy)结果第78-95页
            4.5.1 分类学地位第78-94页
            4.5.2 全部属 Bar 条码图谱第94页
            4.5.3 属水平 Heatmap 图谱第94-95页
    5 讨论第95-98页
第四章 一株假单胞菌新种 Pseudomonas tarimense MA-69T的精确分类学鉴定第98-123页
    1 材料与方法第98-100页
        1.1 样品来源第98页
        1.2 模式菌株第98页
        1.3 培养基第98-99页
        1.4 试剂第99页
        1.5 仪器第99页
        1.6 引物第99-100页
    2 试验方法第100-112页
        2.1 形态和培养特征第100页
        2.2 生长特征第100-101页
        2.3 生理生化特征第101-104页
            2.3.1 API 的测定第101-102页
            2.3.2 Biolog 生理生化特征检测第102-103页
            2.3.3 其它生理生化特性的检测第103-104页
            2.3.4 抗生素敏感性检测第104页
            2.3.5 荧光色素的测定第104页
        2.4 细胞化学组分分析第104-109页
            2.4.1 全细胞脂肪酸分析第104-106页
                2.4.1.1 试剂的配制第105页
                2.4.1.2 提取方法第105-106页
                2.4.1.3 气相色谱测定第106页
            2.4.2 醌组分分析第106-107页
                2.4.2.1 菌体的收集第106页
                2.4.2.2 醌的提取和纯化第106-107页
                2.4.2.3 反相高效液相色谱法(reversed-HPLC)测定醌组分第107页
            2.4.3 细菌细胞膜磷酸类之组分分析第107-109页
        2.5 遗传特征分析第109-112页
            2.5.1 基于 16S rDNA 系统发育分析第109页
            2.5.2 细菌 GC 含量的测定第109-111页
            2.5.3 DNA-DNA 杂交第111-112页
    3 结果第112-121页
        3.1 菌株的分离与保藏第112页
        3.2 形态特征第112页
        3.3 生理特征第112-113页
        3.4 生理生化测定第113-114页
        3.5 细胞化学组分的测定第114-116页
            3.5.1 脂肪酸组分分析第114-115页
            3.5.2 细胞醌组分第115-116页
            3.5.3 极性脂组分分析第116页
        3.6 遗传型特征第116-121页
            3.6.1 16S rRNA 基因序列系统发育分析结果第116-121页
            3.6.2 (G+C)mol%含量的测定结果第121页
            3.6.3 DNA-DNA 分子杂交结果第121页
    4 讨论第121-123页
第五章 结论与展望第123-127页
    1 结论第123-125页
    2 展望第125-127页
参考文献第127-135页
附录第135-138页
致谢第138-139页
在读期间发表的期刊论文第139-140页
作者简介第140页

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