| 目录 | 第3-6页 |
| CONTENTS | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-30页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第13-14页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌的活性因子 | 第14-23页 |
| 1.2.1 杀虫晶体蛋白 | 第14-19页 |
| 1.2.2 营养期杀虫蛋白 | 第19-23页 |
| 1.2.3 几丁质酶 | 第23页 |
| 1.2.4 群体感应内酯酶 | 第23页 |
| 1.3 杀虫蛋白与其它物质间的增效 | 第23-24页 |
| 1.3.1 杀虫晶体蛋白之间的互作 | 第23-24页 |
| 1.3.2 Cry1与Vip3A之间的增效 | 第24页 |
| 1.3.3 碱性几丁质酶的增效作用 | 第24页 |
| 1.4 杀虫蛋白的应用 | 第24-26页 |
| 1.4.1 Bt杀虫剂 | 第24-25页 |
| 1.4.2 cry基因在转基因植物中的应用 | 第25-26页 |
| 1.5 杀虫蛋白应用中遇到的问题 | 第26-27页 |
| 1.6 本研究中涉及的重要农业害虫 | 第27-29页 |
| 1.6.1 甜菜夜蛾 | 第27-28页 |
| 1.6.2 亚洲玉米螟 | 第28-29页 |
| 1.6.3 大猿叶甲 | 第29页 |
| 1.7 本研究的立题依据和目的意义 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-47页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第30-37页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第30页 |
| 2.1.2 酶及生化试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 PCR引物及序列 | 第31-32页 |
| 2.1.4 培养基 | 第32-33页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第33页 |
| 2.1.6 标准分子量 | 第33页 |
| 2.1.7 仪器设备 | 第33-34页 |
| 2.1.8 常用溶液与缓冲液 | 第34-36页 |
| 2.1.9 供试昆虫 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-47页 |
| 2.2.1 菌株的分离 | 第37页 |
| 2.2.2 晶体形态观察 | 第37页 |
| 2.2.3 Bt基因组的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.4 Bt菌株的多样性分析 | 第38页 |
| 2.2.5 PCR初级模板的制备 | 第38页 |
| 2.2.6 PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.7 酶切反应 | 第39页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第39页 |
| 2.2.9 DNA切胶回收 | 第39-40页 |
| 2.2.10 PCR纯化回收 | 第40页 |
| 2.2.11 DNA片段的连接 | 第40-41页 |
| 2.2.12 大肠杆菌热激感受态细胞的制备 | 第41页 |
| 2.2.13 大肠杆菌热激转化 | 第41页 |
| 2.2.14 大肠杆菌质粒阳性转化子的筛选 | 第41页 |
| 2.2.15 大肠杆菌质粒的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.16 基因在大肠杆菌中表达 | 第42页 |
| 2.2.17 Ni-Agarose His标签蛋白亲和层析蛋白质 | 第42-43页 |
| 2.2.18 苏云金芽胞杆菌蛋白电泳检测 | 第43-44页 |
| 2.2.19 大肠杆菌表达蛋白的蛋白质电泳检测 | 第44页 |
| 2.2.20 蛋白定量的方法 | 第44页 |
| 2.2.21 蛋白条带的质谱检测 | 第44页 |
| 2.2.22 甜菜夜蛾生物活性测定 | 第44-45页 |
| 2.2.23 亚洲玉米螟生物活性测定 | 第45页 |
| 2.2.24 大猿叶甲生物活性测定 | 第45页 |
| 2.2.25 生测数据分析 | 第45页 |
| 2.2.26 苏云金芽胞杆菌几丁质酶活性的检测 | 第45页 |
| 2.2.27 基于16S rDNA基因序列构建系统发育树 | 第45-46页 |
| 2.2.28 生化特征鉴定 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-60页 |
| 3.1 Bt菌株的分离鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2 Bt菌株的多样性分析 | 第48-49页 |
| 3.3 扫描电镜观察晶体形态 | 第49-50页 |
| 3.4 Bt菌株晶体蛋白SDS-PAGE分析 | 第50页 |
| 3.5 室内杀虫活性测定 | 第50-52页 |
| 3.5.1 初筛 | 第50-52页 |
| 3.5.2 复筛 | 第52页 |
| 3.6 蛋白质谱结果分析 | 第52-53页 |
| 3.7 Bt菌株HTS-S-38杀虫蛋白基因型的PCR-RFLP鉴定 | 第53页 |
| 3.8 Bt菌株HTS-S-38几丁质酶活性检测 | 第53-54页 |
| 3.9 基于Bt菌株HTS-S-38 16S rDNA基因序列的系统发育分析 | 第54-55页 |
| 3.10 Bt菌株HTS-S-38生化指标鉴定 | 第55-56页 |
| 3.11 vip3Aa43基因的表达纯化及生物活性测定 | 第56-60页 |
| 3.11.1 含vip3Aa43基因片段的表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 3.11.2 vip3Aa43基因的诱导表达 | 第58-59页 |
| 3.11.3 Vip3Aa43蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第75页 |
