符号说明 | 第4-9页 |
中文摘要 | 第9-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
1 前言 | 第12-26页 |
1.1 启动子概述 | 第12-21页 |
1.1.1 启动子的结构与功能 | 第12-14页 |
1.1.1.1 启动子中的保守元件 | 第13-14页 |
1.1.2 植物启动子的类型 | 第14-19页 |
1.1.2.1 组成型表达启动子 | 第14页 |
1.1.2.2 组织特异性启动子 | 第14-15页 |
1.1.2.3 诱导型表达启动子 | 第15-19页 |
1.1.2.3.1 物理因素诱导的启动子 | 第15-17页 |
1.1.2.3.2 化学因素诱导的启动子 | 第17-18页 |
1.1.2.3.3 生物因素诱导的启动子 | 第18-19页 |
1.1.3 启动子的研究方法 | 第19-21页 |
1.1.4 启动子活性检测中使用的报告基因 | 第21页 |
1.2 玉米纹枯病概述 | 第21-26页 |
1.2.1 病原菌 | 第22页 |
1.2.2 症状 | 第22-23页 |
1.2.3 病原菌的侵染循环 | 第23页 |
1.2.4 玉米纹枯病的防治 | 第23页 |
1.2.5 玉米纹枯病菌抗性研究 | 第23-24页 |
1.2.6 玉米纹枯病的致病机制 | 第24-26页 |
1.3 研究的目的和意义 | 第26页 |
2 实验材料和方法 | 第26-32页 |
2.1 植物材料 | 第26-27页 |
2.1.1 菌株与载体 | 第26页 |
2.1.2 材料处理方法 | 第26-27页 |
2.1.2.1 玉米纹枯病菌的培养 | 第26页 |
2.1.2.2 常用酶与生化试剂 | 第26-27页 |
2.1.2.3 常用仪器 | 第27页 |
2.1.2.4 溶液及培养基的配制 | 第27页 |
2.2 pGRMZM2G084947启动子表达载体构建 | 第27-29页 |
2.2.1 PCR引物设计 | 第27-28页 |
2.2.2 B73基因组DNA的提取 | 第28页 |
2.2.3 pGRMZM2G084947启动子片段的扩增 | 第28页 |
2.2.4 启动子片段的切胶回收和酶切 | 第28页 |
2.2.5 空载体和目的片段的酶切产物纯化 | 第28-29页 |
2.2.6 感受态细胞的制备 | 第29页 |
2.2.7 热激转化大肠杆菌DH5α | 第29页 |
2.2.8 质粒DNA的提取 | 第29页 |
2.2.9 电转化农杆菌感受态细胞 | 第29页 |
2.3 转基因阳性水稻的获得 | 第29-31页 |
2.3.1 农杆菌介导的遗传转化 | 第30页 |
2.3.2 转基因水稻阳性检测 | 第30页 |
2.3.2.1 水稻基因组DNA提取 | 第30页 |
2.3.2.2 PCR阳性检测 | 第30页 |
2.3.2.3 GUS组织化学染色 | 第30页 |
2.3.3 GUS定量分析 | 第30-31页 |
2.3.4 玉米纹枯病菌YWK-196接种水稻 | 第31页 |
2.4 pGRMZM2G084947启动子各截短载体的构建 | 第31页 |
2.5 农杆菌介导的烟草瞬时表达转化 | 第31-32页 |
2.5.1 玉米纹枯病菌YWK-196接种烟草 | 第31-32页 |
2.5.2 农杆菌介导的烟草瞬时表达转化 | 第32页 |
2.6 GFP的定性及定量分析 | 第32页 |
3 结果与分析 | 第32-42页 |
3.1 pGRMZM2G084947启动子的结构分析 | 第32-33页 |
3.2 pGRMZM2G084947启动子表达载体的构建 | 第33-34页 |
3.3 转基因水稻阳性鉴定 | 第34-35页 |
3.4 pGRMZM2G084947启动子的组织表达模式 | 第35-36页 |
3.5 pGRMZM2G084947启动子的病原诱导表达模式 | 第36-37页 |
3.6 构建不同截短启动子的重组载体并在本生烟上瞬时表达验证 | 第37-39页 |
3.7 确定pGRMZM2G084947启动子病原诱导的核心区域 | 第39-42页 |
4 讨论 | 第42-44页 |
5 结论 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-54页 |
致谢 | 第54-55页 |
附录Ⅰ 实验试剂 | 第55-56页 |
附录Ⅱ 实验仪器 | 第56-57页 |
附录Ⅲ 常用培养基配方 | 第57-60页 |
附录Ⅳ 常用实验方法 | 第60-61页 |
附录Ⅴ 研究成果 | 第61页 |