| CONTENTS | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-28页 |
| 1.1 杀虫晶体蛋白 | 第14-16页 |
| 1.1.1 Cry毒素 | 第15页 |
| 1.1.2 Cyt毒素 | 第15-16页 |
| 1.2 Cry毒素的结构与功能 | 第16-17页 |
| 1.2.1 Domain Ⅰ | 第16-17页 |
| 1.2.2 Domain Ⅱ | 第17页 |
| 1.2.3 Domain Ⅲ | 第17页 |
| 1.3 Bt的应用 | 第17-19页 |
| 1.3.1 Bt制剂 | 第17-18页 |
| 1.3.2 转cry基因作物 | 第18-19页 |
| 1.4 Cry毒素的作用机制 | 第19-21页 |
| 1.4.1 连续结合模型 | 第19-20页 |
| 1.4.2 信号转导模型 | 第20-21页 |
| 1.4.3 Jurat-Fuentes模型 | 第21页 |
| 1.5 Cry毒素的受体 | 第21-25页 |
| 1.5.1 APN | 第21-24页 |
| 1.5.2 钙黏蛋白 | 第24-25页 |
| 1.5.3 碱性磷酸酯酶 | 第25页 |
| 1.5.4 其它受体 | 第25页 |
| 1.6 配体垂钓平台的建立 | 第25-26页 |
| 1.7 CrylAh蛋白和Cry1Ac蛋白 | 第26-27页 |
| 1.8 本研究的立题依据和目的意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.1.3 供试昆虫 | 第29页 |
| 2.1.4 试剂 | 第29-32页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第32页 |
| 2.2 研究方法 | 第32-37页 |
| 2.2.1 棉铃虫中肠RNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2 RT-PCR法克隆受体蛋白基因apnl | 第33页 |
| 2.2.3 PCR产物回收 | 第33页 |
| 2.2.4 重组原核表达载体的构建 | 第33页 |
| 2.2.5 酶切反应 | 第33-34页 |
| 2.2.6 目的片段与载体的连接 | 第34页 |
| 2.2.7 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备与转化 | 第34页 |
| 2.2.8 阳性克隆的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第35页 |
| 2.2.10 序列测定及分析 | 第35页 |
| 2.2.11 棉铃虫中肠受体蛋白APN1提取方法 | 第35页 |
| 2.2.12 Cry蛋白的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE电泳检测及Western杂交 | 第36页 |
| 2.2.14 蛋白条带的质谱检测 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-53页 |
| 3.1 棉铃虫中肠受体APN1引物设计 | 第37-38页 |
| 3.1.1 APN1全长引物设计 | 第37-38页 |
| 3.1.2 APN1片段引物设计 | 第38页 |
| 3.2 棉铃虫中肠RNA提取 | 第38页 |
| 3.3 棉铃虫中肠受体蛋白基因apnl的克隆 | 第38-39页 |
| 3.3.1 RT-PCR克隆apnl全长基因 | 第38-39页 |
| 3.3.2 apnl基因分段克隆 | 第39页 |
| 3.4 真核基因-原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.5 APN1氨基酸序列分析 | 第40-42页 |
| 3.5.1 N-连接的糖基化位点分析 | 第40-41页 |
| 3.5.2 O-连接的糖基化位点分析 | 第41页 |
| 3.5.3 GPI锚定位点位点分析 | 第41页 |
| 3.5.4 APN1全长氨基酸序列分析 | 第41-42页 |
| 3.6 APN1在大肠杆菌中表达条件的探索 | 第42-44页 |
| 3.7 原核系统中表达的棉铃虫APN1蛋白的质谱分析 | 第44-46页 |
| 3.8 APN1片段在大肠杆菌中的表达及鉴定 | 第46-48页 |
| 3.9 Western杂交 | 第48-53页 |
| 3.9.1 棉铃虫APN1与CrylAh蛋白的结合 | 第48-50页 |
| 3.9.2 棉铃虫APN1与CrylAc蛋白的结合 | 第50-52页 |
| 3.9.3 棉铃虫APN1片段与CrylAh蛋白的结合 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第68页 |
