| 摘要 | 第4-12页 |
| Abstract | 第12-20页 |
| 英文缩略词 | 第21-26页 |
| 第一部分 ：共同抑制EGFR、PI3K/Akt/mTOR、STAT3和ERK信号,协同抗胰腺癌活性的研究 | 第26-68页 |
| 1 前言 | 第26-28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-46页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第28-30页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 溶液配制配制 | 第30-33页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.2.3 MTT法检测葫芦素B对胰腺癌细胞生长的影响 | 第34页 |
| 2.2.4 台盼蓝染色法测定葫芦素B对胰腺癌细胞死亡影响 | 第34-35页 |
| 2.2.5 乳酸脱氢酶(LDH)实验检测葫芦素B对胰腺癌细胞死亡影响.. | 第35页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测葫芦素B对胰腺癌细胞死亡和周期分布影响 | 第35-36页 |
| 2.2.7 葫芦素B对BxPC-3和HPAC细胞中相关蛋白的影响 | 第36-38页 |
| 2.2.8 葫芦素B在不同时间点对BxPC-3和HPAC细胞相关蛋白影响.. | 第38页 |
| 2.2.9 敲除BxPC-3和HPAC细胞中EGFR基因 | 第38-39页 |
| 2.2.10 BxPC-3和HPAC细胞中敲除EGFR基因对下游信号通路影响.. | 第39页 |
| 2.2.11 敲除AMPKα基因 | 第39-41页 |
| 2.2.12 葫芦素B对ERK活性的影响 | 第41-42页 |
| 2.2.13 SCH772984与葫芦素B在胰腺癌细胞中的协同作用 | 第42-43页 |
| 2.2.14 葫芦素B与SCH772984联合使用对相关蛋白影响 | 第43页 |
| 2.2.15 葫芦素B与SCH772984联合使用在体内生物活性 | 第43-44页 |
| 2.2.16 实时定量PCR检测胰腺癌细胞中EGFR的表达水平 | 第44-46页 |
| 3 结果 | 第46-65页 |
| 3.1 EGFR基因在胰腺癌细胞中的表达 | 第46页 |
| 3.2 胰腺癌细胞株对葫芦素B的敏感性 | 第46-47页 |
| 3.3 葫芦素B诱导胰腺癌细胞周期阻滞在G2/M期 | 第47-49页 |
| 3.4 葫芦素B对细胞死亡的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 葫芦素B通过下调EGFR基因表达抑制胰腺癌细胞增殖 | 第50-52页 |
| 3.5.1 葫芦素B抑制EGFR基因的表达 | 第50-51页 |
| 3.5.2 EGFR基因参与了葫芦素B抑制胰腺癌细胞增殖 | 第51-52页 |
| 3.6 葫芦素B对EGFR信号通路及其下游信号通路的影响 | 第52-55页 |
| 3.7 葫芦素B导致的ERK磷酸化是依赖AMPK蛋白的激活 | 第55-58页 |
| 3.8 SCH772984与CuB协同抗胰腺癌作用 | 第58-59页 |
| 3.9 葫芦素B和SCH772984联合使用对细胞死亡影响 | 第59-60页 |
| 3.10 葫芦素B和SCH772984联合使用对相关蛋白影响 | 第60-61页 |
| 3.11 葫芦素B和SCH772984体内抗肿瘤活性 | 第61-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 第二部分 ：葫芦素B作用于AFAP1-AS1/miRNA-146b-5p/EGFR信号网络,抑制胰腺癌细胞的增殖 | 第68-93页 |
| 1 前言 | 第68-69页 |
| 2 材料和方法 | 第69-78页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第69-71页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第69页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第69-70页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第70-71页 |
| 2.2 实验方法 | 第71-78页 |
| 2.2.1 溶液配制 | 第71页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第71页 |
| 2.2.3 实时定量PCR检测胰腺癌细胞中AFAP1-AS1表达水平 | 第71-72页 |
| 2.2.4 葫芦素B对胰腺癌细胞中AFAP1-AS1基因表达影响 | 第72页 |
| 2.2.5 细胞转染 | 第72-73页 |
| 2.2.6 敲除BxPC-3和HPAC细胞中EGFR基因 | 第73页 |
| 2.2.7 构建PGL3-AFAP1-AS1荧光素酶报告基因 | 第73-75页 |
| 2.2.8 构建PGL3-EGFR荧光素酶报告基因 | 第75-76页 |
| 2.2.9 双荧光素酶报告基因实验 | 第76-77页 |
| 2.2.10 葫芦素B对BxPC-3和HPAC细胞相关蛋白的影响 | 第77页 |
| 2.2.11 葫芦素B体内抑制AFAP1-AS1/miRNA-146b-5p/EGFR网络信号 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-91页 |
| 3.1 AFAP1-AS1基因在胰腺癌细胞中的表达 | 第78页 |
| 3.2 胰腺癌细胞株对葫芦素B的敏感性 | 第78-79页 |
| 3.3 葫芦素B抑制AFAP1-AS1的表达,从而抑制细胞增殖 | 第79-83页 |
| 3.3.1 葫芦素B抑制AFAP1-AS1的表达 | 第79-80页 |
| 3.3.2 葫芦素B对胰腺癌细胞增殖抑制依赖于AFAP1-AS1基因 | 第80-81页 |
| 3.3.3 下调AFAP1-AS1基因可导致细胞周期阻滞在G2/M期 | 第81-83页 |
| 3.4 葫芦素B作用于AFAP1-AS1/miR-146b-5p/EGFR信号网络 | 第83-89页 |
| 3.4.1 AFAP1-AS1抑制EGFR基因的表达 | 第83页 |
| 3.4.2 葫芦素B通过诱导miRNA-146b-5p抑制EGFR的表达 | 第83-86页 |
| 3.4.3 miRNA-146b-5p与AFAP1-AS1结合 | 第86-89页 |
| 3.5 葫芦素B体内抑制肿瘤增殖的机制 | 第89-91页 |
| 4 讨论 | 第91-93页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-102页 |
| 综述 | 第102-116页 |
| 参考文献 | 第108-116页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
| 个人简历 | 第118页 |
