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聚球藻PCC 7942拟核、RNA聚合酶与核糖体时空格局的研究

摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
1 绪论第9-28页
    1.1 蓝细菌第9-13页
        1.1.1 蓝细菌概述第9页
        1.1.2 蓝细菌模式菌株聚球藻PCC 7942第9-11页
        1.1.3 细菌中RNA聚合酶概述第11页
        1.1.4 细菌中核糖体概述第11-13页
    1.2 大肠杆菌中RNA聚合酶及核糖体空间排布概述第13-20页
        1.2.1 大肠杆菌中RNA聚合酶空间排布概述第13-15页
        1.2.2 大肠杆菌中核糖体空间排布概述第15-20页
    1.3 聚球藻PCC 7942生物钟节律概述第20-26页
        1.3.1 蓝细菌中存在生物钟节律第20-22页
        1.3.2 聚球藻PCC 7942生物钟节律分子机制第22-24页
        1.3.3 聚球藻PCC 7942中内源性生物钟节律控制拟核空间排布第24-25页
        1.3.4 生物钟节律作用及意义第25-26页
    1.4 本研究实验目的和实验设计第26-28页
        1.4.1 研究目的第26-27页
        1.4.2 实验设计第27-28页
2 聚球藻PCC 7942拟核、RNA聚合酶及核糖体胞内空间排布的节律性第28-52页
    2.1 材料、试剂及仪器第28-29页
        2.1.1 材料第28页
        2.1.2 试剂第28-29页
        2.1.3 仪器第29页
    2.2 实验需要配置的溶液第29-31页
        2.2.1 配置培养基第29-30页
        2.2.2 配置DNA琼脂糖凝胶电泳相关溶液第30-31页
        2.2.3 配置本章节所用到的抗生素及分装步骤第31页
        2.2.4 配置5M NaCl溶液第31页
    2.3 实验方法第31-41页
        2.3.1 制备大肠杆菌DH5α感受态细胞第31-32页
        2.3.2 蓝细菌聚球藻PCC 7942基因组DNA提取第32-33页
        2.3.3 聚合酶链式反应PCR(Polymerase Chain Reaction)第33-35页
        2.3.4 试剂盒纯化片段、凝胶回收片段及连接反应第35-36页
        2.3.5 大肠杆菌细胞的化学转化、阳性克隆鉴定、质粒提取及菌株冻存第36-38页
        2.3.6 聚球藻PCC 7942转化、阳性克隆鉴定及菌株冻存第38-39页
        2.3.7 聚球藻PCC 7942藻种培养、日常传代及复苏第39-40页
        2.3.8 活细胞DNA荧光染色(DAPI, Solarbio)第40页
        2.3.9 荧光显微镜观察第40-41页
    2.4 质粒和菌株构建第41-47页
        2.4.1 质粒构建第42-44页
        2.4.2 荧光蛋白标记菌株RpoC2和RpsB构建第44-46页
        2.4.3 荧光蛋白标记菌株及野生型生长速率对比第46-47页
    2.5 结果与讨论第47-51页
        2.5.1 RNA聚合酶与拟核的宽视野成像第47-48页
        2.5.2 核糖体与拟核的宽视野成像第48-49页
        2.5.3 时空格局的Kai依赖性第49-51页
    2.6 本章小结第51-52页
3 聚球藻PCC 7942拟核/RNAP/核糖体时空格局与嵌入式(transertion)假说第52-62页
    3.1 材料、试剂及仪器第53-54页
        3.1.1 材料第53页
        3.1.2 试剂第53页
        3.1.3 仪器第53-54页
    3.2 实验需要配置的溶液第54页
        3.2.1 配置BG11培养基第54页
        3.2.2 配置抗生素氯霉素溶液第54页
        3.2.3 配置利福平溶液第54页
    3.3 实验方法第54-56页
        3.3.1 聚球藻PCC 7942藻种培养第54-55页
        3.3.2 DNA荧光染色(DAPI, Solarbio)第55页
        3.3.3 荧光显微镜观察第55页
        3.3.4 利用Photo Shop、Image J、MATLAB等软件进行图片处理第55-56页
    3.4 翻译抑制剂氯霉素对聚球藻PCC 7942胞内拟核、RNA聚合酶、核糖体空间排布影响研究第56-59页
        3.4.1 氯霉素对RNA聚合酶空间排布的影响第56-57页
        3.4.2 氯霉素对核糖体的影响第57-59页
    3.5 转录抑制剂利福平对聚球藻PCC 7942胞内拟核、RNA聚合酶、核糖体空间排布影响研究第59-61页
        3.5.1 利福平对RNA聚合酶的影响第59-60页
        3.5.2 利福平对核糖体的影响第60-61页
    3.6 本章小结第61-62页
4 聚球藻PCC 7942 RNAP、核糖体胞内数量的变化规律第62-68页
    4.1 材料、试剂及仪器第62-63页
        4.1.1 材料第62页
        4.1.2 试剂第62-63页
        4.1.3 仪器第63页
    4.2 实验需要配置的溶液第63-64页
        4.2.1 配置10×M9 salt培养基第63页
        4.2.2 配置M9固体培养基及液体培养基第63-64页
        4.2.3 配置BG11液体培养基第64页
    4.3 实验方法第64-66页
        4.3.1 对照菌株E.Coli DH5α准备工作第64页
        4.3.2 聚球藻PCC 7942藻种培养第64页
        4.3.3 流式细胞仪分析方法第64-66页
    4.4 聚球藻PCC 7942胞内RNA聚合酶及核糖体拷贝数定量第66页
    4.5 本章小结第66-68页
5 结论与展望第68-70页
    5.1 研究结论第68-69页
    5.2 研究创新点第69页
    5.3 后续工作建议第69-70页
参考文献第70-77页
致谢第77-79页
攻读学位期间发表的学术论文目录第79-80页

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