摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4-5页 |
1 绪论 | 第9-28页 |
1.1 蓝细菌 | 第9-13页 |
1.1.1 蓝细菌概述 | 第9页 |
1.1.2 蓝细菌模式菌株聚球藻PCC 7942 | 第9-11页 |
1.1.3 细菌中RNA聚合酶概述 | 第11页 |
1.1.4 细菌中核糖体概述 | 第11-13页 |
1.2 大肠杆菌中RNA聚合酶及核糖体空间排布概述 | 第13-20页 |
1.2.1 大肠杆菌中RNA聚合酶空间排布概述 | 第13-15页 |
1.2.2 大肠杆菌中核糖体空间排布概述 | 第15-20页 |
1.3 聚球藻PCC 7942生物钟节律概述 | 第20-26页 |
1.3.1 蓝细菌中存在生物钟节律 | 第20-22页 |
1.3.2 聚球藻PCC 7942生物钟节律分子机制 | 第22-24页 |
1.3.3 聚球藻PCC 7942中内源性生物钟节律控制拟核空间排布 | 第24-25页 |
1.3.4 生物钟节律作用及意义 | 第25-26页 |
1.4 本研究实验目的和实验设计 | 第26-28页 |
1.4.1 研究目的 | 第26-27页 |
1.4.2 实验设计 | 第27-28页 |
2 聚球藻PCC 7942拟核、RNA聚合酶及核糖体胞内空间排布的节律性 | 第28-52页 |
2.1 材料、试剂及仪器 | 第28-29页 |
2.1.1 材料 | 第28页 |
2.1.2 试剂 | 第28-29页 |
2.1.3 仪器 | 第29页 |
2.2 实验需要配置的溶液 | 第29-31页 |
2.2.1 配置培养基 | 第29-30页 |
2.2.2 配置DNA琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第30-31页 |
2.2.3 配置本章节所用到的抗生素及分装步骤 | 第31页 |
2.2.4 配置5M NaCl溶液 | 第31页 |
2.3 实验方法 | 第31-41页 |
2.3.1 制备大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第31-32页 |
2.3.2 蓝细菌聚球藻PCC 7942基因组DNA提取 | 第32-33页 |
2.3.3 聚合酶链式反应PCR(Polymerase Chain Reaction) | 第33-35页 |
2.3.4 试剂盒纯化片段、凝胶回收片段及连接反应 | 第35-36页 |
2.3.5 大肠杆菌细胞的化学转化、阳性克隆鉴定、质粒提取及菌株冻存 | 第36-38页 |
2.3.6 聚球藻PCC 7942转化、阳性克隆鉴定及菌株冻存 | 第38-39页 |
2.3.7 聚球藻PCC 7942藻种培养、日常传代及复苏 | 第39-40页 |
2.3.8 活细胞DNA荧光染色(DAPI, Solarbio) | 第40页 |
2.3.9 荧光显微镜观察 | 第40-41页 |
2.4 质粒和菌株构建 | 第41-47页 |
2.4.1 质粒构建 | 第42-44页 |
2.4.2 荧光蛋白标记菌株RpoC2和RpsB构建 | 第44-46页 |
2.4.3 荧光蛋白标记菌株及野生型生长速率对比 | 第46-47页 |
2.5 结果与讨论 | 第47-51页 |
2.5.1 RNA聚合酶与拟核的宽视野成像 | 第47-48页 |
2.5.2 核糖体与拟核的宽视野成像 | 第48-49页 |
2.5.3 时空格局的Kai依赖性 | 第49-51页 |
2.6 本章小结 | 第51-52页 |
3 聚球藻PCC 7942拟核/RNAP/核糖体时空格局与嵌入式(transertion)假说 | 第52-62页 |
3.1 材料、试剂及仪器 | 第53-54页 |
3.1.1 材料 | 第53页 |
3.1.2 试剂 | 第53页 |
3.1.3 仪器 | 第53-54页 |
3.2 实验需要配置的溶液 | 第54页 |
3.2.1 配置BG11培养基 | 第54页 |
3.2.2 配置抗生素氯霉素溶液 | 第54页 |
3.2.3 配置利福平溶液 | 第54页 |
3.3 实验方法 | 第54-56页 |
3.3.1 聚球藻PCC 7942藻种培养 | 第54-55页 |
3.3.2 DNA荧光染色(DAPI, Solarbio) | 第55页 |
3.3.3 荧光显微镜观察 | 第55页 |
3.3.4 利用Photo Shop、Image J、MATLAB等软件进行图片处理 | 第55-56页 |
3.4 翻译抑制剂氯霉素对聚球藻PCC 7942胞内拟核、RNA聚合酶、核糖体空间排布影响研究 | 第56-59页 |
3.4.1 氯霉素对RNA聚合酶空间排布的影响 | 第56-57页 |
3.4.2 氯霉素对核糖体的影响 | 第57-59页 |
3.5 转录抑制剂利福平对聚球藻PCC 7942胞内拟核、RNA聚合酶、核糖体空间排布影响研究 | 第59-61页 |
3.5.1 利福平对RNA聚合酶的影响 | 第59-60页 |
3.5.2 利福平对核糖体的影响 | 第60-61页 |
3.6 本章小结 | 第61-62页 |
4 聚球藻PCC 7942 RNAP、核糖体胞内数量的变化规律 | 第62-68页 |
4.1 材料、试剂及仪器 | 第62-63页 |
4.1.1 材料 | 第62页 |
4.1.2 试剂 | 第62-63页 |
4.1.3 仪器 | 第63页 |
4.2 实验需要配置的溶液 | 第63-64页 |
4.2.1 配置10×M9 salt培养基 | 第63页 |
4.2.2 配置M9固体培养基及液体培养基 | 第63-64页 |
4.2.3 配置BG11液体培养基 | 第64页 |
4.3 实验方法 | 第64-66页 |
4.3.1 对照菌株E.Coli DH5α准备工作 | 第64页 |
4.3.2 聚球藻PCC 7942藻种培养 | 第64页 |
4.3.3 流式细胞仪分析方法 | 第64-66页 |
4.4 聚球藻PCC 7942胞内RNA聚合酶及核糖体拷贝数定量 | 第66页 |
4.5 本章小结 | 第66-68页 |
5 结论与展望 | 第68-70页 |
5.1 研究结论 | 第68-69页 |
5.2 研究创新点 | 第69页 |
5.3 后续工作建议 | 第69-70页 |
参考文献 | 第70-77页 |
致谢 | 第77-79页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第79-80页 |