| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 研究的目的和意义 | 第12-13页 |
| 1.2 大豆异黄酮的概述 | 第13-14页 |
| 1.2.1 大豆异黄酮的物化性质 | 第13页 |
| 1.2.2 大豆异黄酮的生理及保健功能 | 第13-14页 |
| 1.3 植物遗传转化技术概述 | 第14-17页 |
| 1.3.1 农杆菌介导的遗传转化 | 第15页 |
| 1.3.2 花粉管通道法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 基因枪法 | 第16页 |
| 1.3.4 电激法 | 第16-17页 |
| 1.3.5 聚乙二醇法 | 第17页 |
| 1.3.6 超声波辅助农杆菌转化法 | 第17页 |
| 1.4 应用于大豆遗传转化的再生系统 | 第17-20页 |
| 1.4.1 丛生芽器官发生途径 | 第18-19页 |
| 1.4.2 原生质体系统 | 第19-20页 |
| 1.4.3 体细胞胚胎发生途径 | 第20页 |
| 1.5 影响农杆菌介导遗传转化的影响因素 | 第20-23页 |
| 1.5.1 受体类型 | 第20-21页 |
| 1.5.2 基因型 | 第21页 |
| 1.5.3 农杆菌菌株 | 第21页 |
| 1.5.4 筛选条件与筛选方式 | 第21-22页 |
| 1.5.5 培养条件与激素 | 第22-23页 |
| 第二章 CHS8 和 MYB12B2 基因植物表达载体构建 | 第23-37页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 质粒和菌种 | 第23页 |
| 2.1.3 酶和相关试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 大豆叶片 RNA 的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 RNA 反转录成 cDNA | 第24-25页 |
| 2.2.3 CHS8 和 MYB12b2 基因克隆相关引物 | 第25-26页 |
| 2.2.4 CHS8 和 MYB12b2 基因的克隆与回收 | 第26-28页 |
| 2.2.5 目的片段与 pMD18-T 载体连接 | 第28页 |
| 2.2.6 大肠杆菌 DH5α感受态制备 | 第28-29页 |
| 2.2.7 热激法转化大肠杆菌 | 第29页 |
| 2.2.8 提取质粒 | 第29-30页 |
| 2.2.9 酶切鉴定与测序 | 第30页 |
| 2.2.10 Gateway 技术连接植物表达载体 | 第30-32页 |
| 2.2.11 提取重组质粒 DNA | 第32-33页 |
| 2.2.12 农杆菌 EHA105 感受态制备 | 第33-34页 |
| 2.2.13 电击法转化农杆菌 | 第34页 |
| 2.2.14 PCR 鉴定 | 第34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-36页 |
| 2.3.1 CHS8 和 MYB12b2 基因 PCR 扩增产物分析 | 第34-35页 |
| 2.3.2 目的基因与 pMD18-T 载体连接双酶切鉴定与测序 | 第35页 |
| 2.3.3 植物表达载体的构建（Gateway） | 第35-36页 |
| 2.3.4 转化农杆菌的 PCR 鉴定 | 第36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 大豆胚尖遗传转化体系的优化 | 第37-54页 |
| 3.1 材料 | 第37-40页 |
| 3.1.1 受体材料 | 第37页 |
| 3.1.2 载体和菌株 | 第37页 |
| 3.1.3 激素和相关试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 3.1.5 基础培养基 | 第39-40页 |
| 3.1.6 遗传转化过程相关培养基 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-45页 |
| 3.2.1 胚尖遗传转化体系的基本流程 | 第40-42页 |
| 3.2.2 胚尖遗传转化体系的优化 | 第42页 |
| 3.2.3 丛生芽发生位置 | 第42页 |
| 3.2.4 萌发时间及培养基的选择 | 第42-43页 |
| 3.2.5 激素 2, 4-D 对抗性植株再生率的影响 | 第43页 |
| 3.2.6 超声波对再生效果的影响 | 第43-45页 |
| 3.2.7 筛选浓度 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-53页 |
| 3.3.1 丛生芽发生位置 | 第45-46页 |
| 3.3.2 萌发时间及培养基的选择 | 第46-48页 |
| 3.3.3 激素 2,4-D 对抗性植株再生率的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.4 超声波对再生效果的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.5 筛选浓度 | 第50-52页 |
| 3.3.6 优化后的胚尖遗传转化率 | 第52-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第四章 转基因植株的鉴定及异黄酮含量测定 | 第54-63页 |
| 4.1 材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 仪器 | 第54页 |
| 4.1.2 试剂 | 第54-55页 |
| 4.2 方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 T_0代植株的 PCR 检测 | 第55-56页 |
| 4.2.2 T_0代植株 bar 试纸条检测 | 第56页 |
| 4.2.3 T_1代植株的 Glufosinate 涂抹及 PCR 检测 | 第56页 |
| 4.2.4 T_2代植株的异黄酮含量测定 | 第56-57页 |
| 4.3 结果与分析 | 第57-62页 |
| 4.3.1 T_0代植株 PCR 检测 | 第57-58页 |
| 4.3.2 T_0代植株 bar 基因试纸条检测 | 第58-59页 |
| 4.3.3 T_1代植株的 Glufosinate 涂抹检测 | 第59页 |
| 4.3.4 T_1代植株的 PCR 检测 | 第59-60页 |
| 4.3.5 T_2代植株的异黄酮含量测定 | 第60-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 作者简介 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
