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大豆胚尖遗传转化体系的优化及CHS8,MYB12b2基因的遗传转化

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第一章 绪论第12-23页
    1.1 研究的目的和意义第12-13页
    1.2 大豆异黄酮的概述第13-14页
        1.2.1 大豆异黄酮的物化性质第13页
        1.2.2 大豆异黄酮的生理及保健功能第13-14页
    1.3 植物遗传转化技术概述第14-17页
        1.3.1 农杆菌介导的遗传转化第15页
        1.3.2 花粉管通道法第15-16页
        1.3.3 基因枪法第16页
        1.3.4 电激法第16-17页
        1.3.5 聚乙二醇法第17页
        1.3.6 超声波辅助农杆菌转化法第17页
    1.4 应用于大豆遗传转化的再生系统第17-20页
        1.4.1 丛生芽器官发生途径第18-19页
        1.4.2 原生质体系统第19-20页
        1.4.3 体细胞胚胎发生途径第20页
    1.5 影响农杆菌介导遗传转化的影响因素第20-23页
        1.5.1 受体类型第20-21页
        1.5.2 基因型第21页
        1.5.3 农杆菌菌株第21页
        1.5.4 筛选条件与筛选方式第21-22页
        1.5.5 培养条件与激素第22-23页
第二章 CHS8 和 MYB12B2 基因植物表达载体构建第23-37页
    2.1 材料第23-24页
        2.1.1 植物材料第23页
        2.1.2 质粒和菌种第23页
        2.1.3 酶和相关试剂第23页
        2.1.4 主要仪器第23-24页
    2.2 方法第24-34页
        2.2.1 大豆叶片 RNA 的提取第24页
        2.2.2 RNA 反转录成 cDNA第24-25页
        2.2.3 CHS8 和 MYB12b2 基因克隆相关引物第25-26页
        2.2.4 CHS8 和 MYB12b2 基因的克隆与回收第26-28页
        2.2.5 目的片段与 pMD18-T 载体连接第28页
        2.2.6 大肠杆菌 DH5α感受态制备第28-29页
        2.2.7 热激法转化大肠杆菌第29页
        2.2.8 提取质粒第29-30页
        2.2.9 酶切鉴定与测序第30页
        2.2.10 Gateway 技术连接植物表达载体第30-32页
        2.2.11 提取重组质粒 DNA第32-33页
        2.2.12 农杆菌 EHA105 感受态制备第33-34页
        2.2.13 电击法转化农杆菌第34页
        2.2.14 PCR 鉴定第34页
    2.3 结果与分析第34-36页
        2.3.1 CHS8 和 MYB12b2 基因 PCR 扩增产物分析第34-35页
        2.3.2 目的基因与 pMD18-T 载体连接双酶切鉴定与测序第35页
        2.3.3 植物表达载体的构建(Gateway)第35-36页
        2.3.4 转化农杆菌的 PCR 鉴定第36页
    2.4 本章小结第36-37页
第三章 大豆胚尖遗传转化体系的优化第37-54页
    3.1 材料第37-40页
        3.1.1 受体材料第37页
        3.1.2 载体和菌株第37页
        3.1.3 激素和相关试剂第37-38页
        3.1.4 主要仪器设备第38-39页
        3.1.5 基础培养基第39-40页
        3.1.6 遗传转化过程相关培养基第40页
    3.2 方法第40-45页
        3.2.1 胚尖遗传转化体系的基本流程第40-42页
        3.2.2 胚尖遗传转化体系的优化第42页
        3.2.3 丛生芽发生位置第42页
        3.2.4 萌发时间及培养基的选择第42-43页
        3.2.5 激素 2, 4-D 对抗性植株再生率的影响第43页
        3.2.6 超声波对再生效果的影响第43-45页
        3.2.7 筛选浓度第45页
    3.3 结果与分析第45-53页
        3.3.1 丛生芽发生位置第45-46页
        3.3.2 萌发时间及培养基的选择第46-48页
        3.3.3 激素 2,4-D 对抗性植株再生率的影响第48-49页
        3.3.4 超声波对再生效果的影响第49-50页
        3.3.5 筛选浓度第50-52页
        3.3.6 优化后的胚尖遗传转化率第52-53页
    3.4 本章小结第53-54页
第四章 转基因植株的鉴定及异黄酮含量测定第54-63页
    4.1 材料第54-55页
        4.1.1 仪器第54页
        4.1.2 试剂第54-55页
    4.2 方法第55-57页
        4.2.1 T_0代植株的 PCR 检测第55-56页
        4.2.2 T_0代植株 bar 试纸条检测第56页
        4.2.3 T_1代植株的 Glufosinate 涂抹及 PCR 检测第56页
        4.2.4 T_2代植株的异黄酮含量测定第56-57页
    4.3 结果与分析第57-62页
        4.3.1 T_0代植株 PCR 检测第57-58页
        4.3.2 T_0代植株 bar 基因试纸条检测第58-59页
        4.3.3 T_1代植株的 Glufosinate 涂抹检测第59页
        4.3.4 T_1代植株的 PCR 检测第59-60页
        4.3.5 T_2代植株的异黄酮含量测定第60-62页
    4.4 本章小结第62-63页
结论第63-64页
参考文献第64-73页
作者简介第73-74页
致谢第74页

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