| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 猪圆环病毒(PCV)的起源与分类学 | 第11页 |
| 1.2 PCV的危害 | 第11-12页 |
| 1.3 PCV2 的生物学特征 | 第12-16页 |
| 1.3.1 PCV2 的分型与流行病学 | 第13页 |
| 1.3.2 PCV2 主要的开放阅读框 | 第13-14页 |
| 1.3.3 PCV2 细胞侵染及分子致病机理 | 第14-15页 |
| 1.3.4 PCV2 Cap蛋白在致病性中的作用 | 第15-16页 |
| 1.4 PCV2 Cap的结构和功能 | 第16页 |
| 1.5 PCV2 病毒样颗粒(Virus like particles, VLPs)的研究与应用 | 第16-18页 |
| 1.5.1 VLPs研究和应用的潜在价值 | 第16-17页 |
| 1.5.2 PCV2 VLPs的制备方法 | 第17页 |
| 1.5.3 PCV2 VLPs代替野生型病毒研究入侵机理 | 第17-18页 |
| 1.6 PCV2 感染性克隆的构建 | 第18-20页 |
| 第二章 本研究的目的意义及技术路线 | 第20-22页 |
| 2.1 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 第三章 中国南部地区PCV2 流行病学调查及新型PCV2b突变毒株表面结构的模拟 | 第22-40页 |
| 3.1 材料与方法 | 第23-29页 |
| 3.1.1 病料来源 | 第23页 |
| 3.1.2 主要生物学试剂(盒) | 第23-24页 |
| 3.1.3 主要设备和仪器 | 第24-25页 |
| 3.1.4 引物的设计和合成 | 第25页 |
| 3.1.5 病毒DNA的提取和PCV2 的检测 | 第25-27页 |
| 3.1.6 PCV2 全长基因的PCR扩增 | 第27页 |
| 3.1.7 PCV2 全长基因PCR产物的克隆 | 第27-28页 |
| 3.1.8 生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 3.1.9 蛋白 3D结构展示 | 第29页 |
| 3.2 结果 | 第29-37页 |
| 3.2.1 PCV2 的检测和全长基因的扩增 | 第29页 |
| 3.2.2 PCV2 系统进化树分型结果和基因分析 | 第29-31页 |
| 3.2.3 PCV2 Cap蛋白序列比对分析 | 第31页 |
| 3.2.4 PCV2b-1C毒株衣壳蛋白表面结构与抗原性分析 | 第31-34页 |
| 3.2.5 PCV2 重组毒株capsid的 3D结构展示 | 第34-37页 |
| 3.3 讨论 | 第37-38页 |
| 3.4 小结 | 第38-40页 |
| 第四章PCVs核衣壳蛋白表面loops结构的模拟分析 | 第40-54页 |
| 4.1 材料与方法 | 第41-42页 |
| 4.1.1 PCVs毒株DNA序列来源 | 第41页 |
| 4.1.2 进化树的构建 | 第41页 |
| 4.1.3 Cap蛋白氨基酸序列比较分析 | 第41页 |
| 4.1.4 蛋白 3D结构的展示 | 第41页 |
| 4.1.5 对PCV1 Cap蛋白和capsid的 3D结构同源建模 | 第41-42页 |
| 4.1.6 磷酸化位点的预测 | 第42页 |
| 4.2 结果 | 第42-52页 |
| 4.2.1 PCV2 系统进化树分型 | 第42-43页 |
| 4.2.2 PCVs Cap蛋白序列差异以及capsid表面loops结构展示 | 第43-44页 |
| 4.2.3 PCV2b capsid五倍轴区域特征 | 第44-49页 |
| 4.2.4 PCV2 Loop CT的结构特征 | 第49-50页 |
| 4.2.5 PCV2 capsid三倍轴区域特征 | 第50页 |
| 4.2.6 PCV2 capsid二倍轴区域特征 | 第50-52页 |
| 4.3 讨论 | 第52-53页 |
| 4.4 小结 | 第53-54页 |
| 第五章PCV2 Cap蛋白及相关突变体蛋白的表达与纯化 | 第54-75页 |
| 5.1 材料与方法 | 第54-65页 |
| 5.1.1 PCV2 毒株、抗体、菌种、表达载体、细胞 | 第54页 |
| 5.1.2 主要生物学试剂(盒) | 第54-56页 |
| 5.1.3 主要设备和仪器 | 第56页 |
| 5.1.4 原核表达载体的构建 | 第56-59页 |
| 5.1.5 重组Cap蛋白的表达和可溶性分析(原核) | 第59-60页 |
| 5.1.6 真核表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 5.1.7 重组杆状病毒DNA的构建与鉴定 | 第61-62页 |
| 5.1.8 昆虫细胞(sf9)的培养 | 第62-63页 |
| 5.1.9 昆虫细胞-杆状病毒表达PCV2 Cap蛋白 | 第63-64页 |
| 5.1.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第64页 |
| 5.1.11 蛋白质印迹法(Western Blot) | 第64-65页 |
| 5.1.12 PCV2 Cap蛋白的纯化 | 第65页 |
| 5.2 结果 | 第65-73页 |
| 5.2.1 原核PCV2 Cap蛋白全长及相关突变体质粒的构建与鉴定 | 第65-67页 |
| 5.2.2 原核PCV2 Cap全长蛋白及核定位信号缺失蛋白的表达 | 第67-68页 |
| 5.2.3 原核PCV2 Cap全长蛋白的纯化 | 第68页 |
| 5.2.4 原核PCV2 Cap核定位信号缺失蛋白的纯化 | 第68-70页 |
| 5.2.5 原核PCV2 Cap Loop CT相关突变体蛋白的纯化 | 第70-71页 |
| 5.2.6 真核PCV2 Cap蛋白全长质粒的构建与鉴定 | 第71页 |
| 5.2.7 重组杆状病毒DNA的构建与鉴定 | 第71-72页 |
| 5.2.8 昆虫细胞-重组杆状病毒系统的建立及PCV2 Cap全长蛋白的真核表达 | 第72-73页 |
| 5.2.9 真核PCV2 Cap全长蛋白的纯化 | 第73页 |
| 5.3 讨论 | 第73-74页 |
| 5.4 小结 | 第74-75页 |
| 第六章PCV2 VLPs的体外组装机理及细胞内化性质的研究 | 第75-91页 |
| 6.1 材料与方法 | 第75-78页 |
| 6.1.1 细胞、抗体、实验动物 | 第75页 |
| 6.1.2 主要生物学试剂(盒) | 第75页 |
| 6.1.3 主要设备和仪器 | 第75-76页 |
| 6.1.4 PCV2 VLPs的制备 | 第76页 |
| 6.1.5 透射电镜(Transmission electron microscopy, TEM)的观察 | 第76页 |
| 6.1.6 分子筛层析检测PCV2 VLPs | 第76页 |
| 6.1.7 PCV2 VLPs进一步提纯 | 第76-77页 |
| 6.1.8 疫苗的配制 | 第77页 |
| 6.1.9 兔多抗的制备 | 第77页 |
| 6.1.10 PCV2 VLPs入侵PK15 细胞实验 | 第77-78页 |
| 6.2 结果 | 第78-88页 |
| 6.2.1 真核PCV2 Cap蛋白的组装 | 第78页 |
| 6.2.2 原核PCV2 Cap蛋白的组装 | 第78-79页 |
| 6.2.3 核定位信号不影响PCV2 VLPs的组装和细胞内化 | 第79-80页 |
| 6.2.4 分子筛验证PCV2 VLPs的组装 | 第80-82页 |
| 6.2.5 PCV2 VLPs的进一步纯化及细胞内化实验 | 第82-83页 |
| 6.2.6 PCV2 VLPs吸附佐剂情况 | 第83页 |
| 6.2.7 PCV2 Cap Loop CT参与病毒的组装和细胞内化 | 第83-84页 |
| 6.2.8 PCV2 Cap Loop CT的PXXP motif不参与病毒的组装和细胞内化 | 第84-86页 |
| 6.2.9 PCV2 Cap Loop CT内的带电荷氨基酸~（227）KD~228参与病毒的细胞内化 | 第86-87页 |
| 6.2.10 PCV2 Cap Loop CT 内的带电荷氨基酸 227K 参与病毒的细胞内化 | 第87-88页 |
| 6.3 讨论 | 第88-90页 |
| 6.4 小结 | 第90-91页 |
| 第七章PCV2 感染性克隆DNA的构建及病毒拯救 | 第91-104页 |
| 7.1 材料与方法 | 第91-96页 |
| 7.1.1 PCV2 毒株、细胞、抗体 | 第91页 |
| 7.1.2 主要生物学试剂(盒) | 第91页 |
| 7.1.3 主要设备和仪器 | 第91页 |
| 7.1.4 野生型PCV2 感染性DNA克隆的构建 | 第91-93页 |
| 7.1.5 突变型PCV2 感染性DNA克隆的构建 | 第93-95页 |
| 7.1.6 PCV2 感染性DNA克隆的转染及间接免疫荧光检测 | 第95-96页 |
| 7.1.7 检测拯救获得的PCV2 滴度 | 第96页 |
| 7.1.8 PCR及荧光定量PCR检测拯救获得的PCV2 及相关突变体 | 第96页 |
| 7.2 结果 | 第96-102页 |
| 7.2.1 野生型及突变型PCV2 感染性DNA克隆的构建与鉴定 | 第96-97页 |
| 7.2.2 间接免疫荧光检测结果 | 第97-98页 |
| 7.2.3 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的检测结果 | 第98页 |
| 7.2.4 PCR检测结果 | 第98-101页 |
| 7.2.5 荧光定量PCR检测结果 | 第101-102页 |
| 7.3 讨论 | 第102-103页 |
| 7.4 小结 | 第103-104页 |
| 第八章 全文总结 | 第104-106页 |
| 8.1 结论 | 第104-105页 |
| 8.2 创新点 | 第105页 |
| 8.3 展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 个人简介 | 第116页 |
