| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 猪miRNA挖掘的高通量技术 | 第13-16页 |
| 1.2 睾丸miRNA表达的物种差异性 | 第16-17页 |
| 1.3 睾丸miRNA表达的阶段特异性 | 第17-19页 |
| 1.4 睾丸miRNA的表达调控 | 第19-20页 |
| 1.5 miRNA对于精子生成的调节作用 | 第20-23页 |
| 1.6 展望 | 第23-24页 |
| 1.7 研究目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 不同发育阶猪睾丸组织段转录组学研究 | 第25-52页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-32页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 总RNA提取 | 第26页 |
| 2.1.4 总RNA质量检测 | 第26-27页 |
| 2.1.5 RNA-seq文库构建及测序 | 第27页 |
| 2.1.6 转录组测序原始数据质控 | 第27-28页 |
| 2.1.7 转录组数据生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.1.8 新基因cDNA全长克隆 | 第29-30页 |
| 2.1.9 实时荧光定量PCR验证 | 第30-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-48页 |
| 2.2.1 总RNA质量检测 | 第32页 |
| 2.2.2 转录组测序数据质量情况 | 第32-33页 |
| 2.2.3 与参考基因组比对情况统计 | 第33-34页 |
| 2.2.4 差异表达基因筛选及验证 | 第34-37页 |
| 2.2.5 差异表达基因的功能分析 | 第37-40页 |
| 2.2.6 可变剪切事件的鉴定及功能分析 | 第40-46页 |
| 2.2.7 新转录本cDNA克隆及组织表达谱 | 第46-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-52页 |
| 第三章 不同发育阶段猪睾丸组织microRNA鉴定及靶基因预测 | 第52-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第52-55页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第52页 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 | 第52-53页 |
| 3.1.3 总RNA提取 | 第53页 |
| 3.1.4 总RNA质量检测 | 第53页 |
| 3.1.5 SmallRNA文库构建及测序 | 第53页 |
| 3.1.6 SmallRNA测序原始数据质控 | 第53页 |
| 3.1.7 SmallRNA数据生物信息学分析 | 第53-54页 |
| 3.1.8 实时荧光定量PCR验证 | 第54-55页 |
| 3.2 结果与分析 | 第55-62页 |
| 3.2.1 测序数据质量及长度分布 | 第55-57页 |
| 3.2.2 猪已知和新的miRNA鉴定 | 第57-58页 |
| 3.2.3 差异表达miRNA的鉴定和验证 | 第58-60页 |
| 3.2.4 miRNA与mRNA联合分析 | 第60页 |
| 3.2.5 靶基因GO功能富集和KEGG通路分析 | 第60-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-65页 |
| 第四章 miR-10b/26a在猪睾丸组织发育过程中的表达及靶基因验证 | 第65-80页 |
| 4.1 材料与方法 | 第65-72页 |
| 4.1.1 试验动物及样品采集 | 第65-66页 |
| 4.1.2 主要仪器及试剂 | 第66页 |
| 4.1.3 睾丸组织切片及HE染色 | 第66-67页 |
| 4.1.4 总RNA提取及质量检测 | 第67页 |
| 4.1.5 miR-10b/26a靶基因预测 | 第67页 |
| 4.1.6 实时荧光定量PCR | 第67-68页 |
| 4.1.7 Westernblot | 第68页 |
| 4.1.8 双荧光素酶报告基因载体构建 | 第68-71页 |
| 4.1.9 猪睾丸细胞系培养及细胞转染 | 第71-72页 |
| 4.2 结果与分析 | 第72-78页 |
| 4.2.1 HE染色结果 | 第72-73页 |
| 4.2.2 miR-10b/26a及其靶基因在不同发育阶段睾丸组织中的表达水平 | 第73-75页 |
| 4.2.3 双荧光素酶报告检测靶基因 | 第75-76页 |
| 4.2.4 过表达和抑制表达miR-10b/26a对靶基因的影响 | 第76-78页 |
| 4.3 讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 结论 | 第80-82页 |
| 5.1 主要结论 | 第80页 |
| 5.2 主要创新点 | 第80-81页 |
| 5.3 下一步研究工作 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 附录 | 第96-111页 |
| 附录一 不同表达水平的转录本的Reads密度分布图 | 第96-97页 |
| 附录二 定量饱和曲线检查分布图 | 第97-98页 |
| 附录三 差异表达miRNA信息 | 第98-109页 |
| 附录四 DAZAP1基因所在信号通路图 | 第109-110页 |
| 附录五 ULK2基因所在信号通路图 | 第110-111页 |
| 主要英文对照缩略表 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 作者简介 | 第114-115页 |
