| 内容提要 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-38页 |
| 1.1 肿瘤的基因治疗进展 | 第16-24页 |
| 1.1.1 肿瘤的基因治疗 | 第16-22页 |
| 1.1.2 肿瘤基因治疗药物开发 | 第22-23页 |
| 1.1.3 肿瘤基因治疗的展望 | 第23-24页 |
| 1.2 肿瘤的基因-放射治疗 | 第24-29页 |
| 1.2.1 肿瘤基因-放射治疗的种类 | 第25-27页 |
| 1.2.2 Egr-1 启动子介导的肿瘤基因放射治疗 | 第27-29页 |
| 1.3 条件复制型腺病毒 | 第29-33页 |
| 1.3.1 腺病毒的基本特性 | 第30页 |
| 1.3.2 腺病毒载体的发展 | 第30-31页 |
| 1.3.3 条件复制型腺病毒构建策略 | 第31-33页 |
| 1.4 Smac 基因 | 第33-36页 |
| 1.4.1 Smac 的分子结构及生物学特性 | 第33页 |
| 1.4.2 Smac 的促凋亡活性及机制 | 第33-35页 |
| 1.4.3 Smac 与肿瘤治疗 | 第35-36页 |
| 1.5 立题依据 | 第36-38页 |
| 第2章 材料与方法 | 第38-60页 |
| 2.1 实验主要材料 | 第38-41页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第38-40页 |
| 2.1.2 实验器材 | 第40页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第40-41页 |
| 2.1.4 实验用细胞、菌株及质粒 | 第41页 |
| 2.2 分子生物学实验 | 第41-53页 |
| 2.2.1 细菌培养技术 | 第41-42页 |
| 2.2.2 感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.3 细菌转化 | 第43-44页 |
| 2.2.4 质粒的小提 | 第44-45页 |
| 2.2.5 DNA 操作 | 第45-46页 |
| 2.2.6 重组穿梭载体 pShuttle-Egr1-Smac-hTERT-HRE-E1A-E1Bp-E1B55K 的构建 | 第46-50页 |
| 2.2.7 重组腺病毒的包装与鉴定 | 第50-53页 |
| 2.3 细胞生物学实验 | 第53-59页 |
| 2.3.1 液体的配制 | 第53页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第53-54页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第54页 |
| 2.3.4 细胞复苏 | 第54页 |
| 2.3.5 细胞分组、乏氧和照射 | 第54-55页 |
| 2.3.6 MTT 法检测细胞增殖 | 第55页 |
| 2.3.7 细胞凋亡的检测 | 第55页 |
| 2.3.8 细胞周期的检测 | 第55页 |
| 2.3.9 实时定量 PCR 检测 mRNA 的表达 | 第55-56页 |
| 2.3.10 Western blotting 检测蛋白的表达 | 第56-59页 |
| 2.4 统计学处理 | 第59-60页 |
| 第3章 实验结果 | 第60-90页 |
| 3.1 重组质粒的构建 | 第60-67页 |
| 3.1.1 目的基因的钓取 | 第60-67页 |
| 3.2 重组腺病毒的包装及鉴定 | 第67-69页 |
| 3.2.1 重组腺病毒包装 | 第67-68页 |
| 3.2.2 重组腺病毒扩增 | 第68页 |
| 3.2.3 重组腺病毒滴度测定 | 第68-69页 |
| 3.3 Smac mRNA 和蛋白的表达特点 | 第69-72页 |
| 3.3.1 标准曲线、溶解曲线和扩增曲线 | 第69-70页 |
| 3.3.2 Smac mRNA 表达特点 | 第70-72页 |
| 3.3.3 Smac 蛋白的表达特点 | 第72页 |
| 3.4 CRAd.pE-Smac 对 MDA-MB-231 细胞增殖的影响 | 第72-73页 |
| 3.5 细胞周期变化 | 第73-76页 |
| 3.6 细胞凋亡变化 | 第76-80页 |
| 3.7 Cyt c mRNA 和蛋白的表达特点 | 第80-83页 |
| 3.7.1 标准曲线、溶解曲线和扩增曲线 | 第80-83页 |
| 3.8 caspase-9 mRNA 和蛋白的表达特点 | 第83-85页 |
| 3.8.1 标准曲线、溶解曲线和扩增曲线 | 第83-85页 |
| 3.9 caspase-3 mRNA 和蛋白的表达特点 | 第85-90页 |
| 3.9.1 标准曲线、溶解曲线和扩增曲线 | 第85-90页 |
| 第4章 讨论 | 第90-94页 |
| 4.1 实验设计及实施的合理性 | 第90-92页 |
| 4.1.1 三重靶向性腺病毒载体的设计 | 第90-91页 |
| 4.1.2 实验方法的选择 | 第91-92页 |
| 4.2 条件复制型腺病毒构建及包装 | 第92页 |
| 4.3 CRAd.pE-Smac 联合X 射线照射对MDA-MB-231 细胞杀伤作用 | 第92-93页 |
| 4.3.1 CRAd.pE-Smac 联合X 射线对MDA-MB-231 细胞增殖的影响 | 第92页 |
| 4.3.2 CRAd.pE-Smac 联合 X 射线照射对 MDA-MB-231 细胞周期和凋亡的影响 | 第92-93页 |
| 4.4 CRAd.pE-Smac 联合 X 射线照射对 MDA-MB-231 细胞杀伤的分子机制 | 第93-94页 |
| 第5章 结论 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及其他成果 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
