| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）简介 | 第10-15页 |
| 1.1.1 NT-proBNP来源及分子结构 | 第10-12页 |
| 1.1.2 NT-proBNP生物学功能及临床应用 | 第12页 |
| 1.1.3 与 BNP 比较，临床上检测 NT-proBNP 的优势 | 第12-13页 |
| 1.1.4 NT-proBNP的检测 | 第13-15页 |
| 1.2 抗体技术 | 第15-18页 |
| 1.2.1 抗体技术简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 单克隆抗体的制备 | 第16-17页 |
| 1.2.3 单克隆抗体的应用 | 第17-18页 |
| 1.3 快速诊断研究 | 第18-20页 |
| 1.3.1 POCT简介 | 第18页 |
| 1.3.2 荧光胶乳免疫层析技术在快速诊断中的应用 | 第18-20页 |
| 1.4 本论文研究目的、主要内容及意义 | 第20-22页 |
| 1.4.1 研究背景及意义 | 第20-21页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 NT-proBNP特异性单克隆的制备及鉴定 | 第22-51页 |
| 2.1 前言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-28页 |
| 2.2.1 实验动物与细胞株 | 第22页 |
| 2.2.2 主要仪器设备、耗材 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.4. 培养基与常用溶液 | 第24-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.3.1 间接ELISA检测 | 第28页 |
| 2.3.2 单克隆抗体HRP标记 | 第28-29页 |
| 2.3.3 间接ELISA法测定标记抗体的工作浓度 | 第29页 |
| 2.3.4 重组NT-proBNP蛋白的鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.5 NT-proBNP单克隆抗体的制备及纯化 | 第31-35页 |
| 2.3.6 单克隆抗体的分析鉴定 | 第35-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-50页 |
| 2.4.1 重组蛋白的鉴定 | 第38-41页 |
| 2.4.1.1 重组蛋白的纯度分析及Western Blot鉴定 | 第38-40页 |
| 2.4.1.2 重组蛋白的活性鉴定 | 第40-41页 |
| 2.4.2 免疫小鼠血清效价的分析 | 第41页 |
| 2.4.3 细胞融合及阳性克隆筛选 | 第41-42页 |
| 2.4.4 四株单克隆抗体亚类的鉴定 | 第42-43页 |
| 2.4.5 四株杂交瘤细胞的腹水及纯化后抗体效价检测 | 第43-44页 |
| 2.4.6 四株纯化后单克隆抗体纯度的检测 | 第44-45页 |
| 2.4.7 单克隆抗体的特异性检定 | 第45-46页 |
| 2.4.7.1 四株单克隆抗体的Western Blot鉴定结果 | 第45页 |
| 2.4.7.2 四株单克隆抗体与其它心肌标志物的交叉反应性检测 | 第45-46页 |
| 2.4.8 四株单克隆抗体亲和力的检测 | 第46-48页 |
| 2.4.9 四株单克隆抗体表位的初步鉴定 | 第48-49页 |
| 2.4.9.1 表位多肽的选择与合成 | 第48-49页 |
| 2.4.9.2 四株单克隆抗体表位的初步鉴定 | 第49页 |
| 2.4.10 四株杂交瘤细胞株的稳定性 | 第49-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 抗人NT-proBNP单克隆抗体在荧光定量免疫层析中的应用 | 第51-66页 |
| 3.1 前言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51-53页 |
| 3.2.1 检测样品 | 第51页 |
| 3.2.2 主要仪器设备 | 第51-52页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.4 常用溶液 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 3.3.1 单克隆抗体HRP标记 | 第53页 |
| 3.3.2 间接ELISA法测定标记抗体的工作浓度 | 第53页 |
| 3.3.3 ELISA平台筛选单克隆抗体的双夹心配对 | 第53-54页 |
| 3.3.4 喷膜 | 第54页 |
| 3.3.5 荧光胶乳标记单克隆抗体 | 第54-55页 |
| 3.3.6 荧光胶乳标记后的单克隆抗体与抗原反应活性的测定 | 第55页 |
| 3.3.7 双夹心单克隆抗体配对在荧光免疫层析平台上的初筛 | 第55-56页 |
| 3.3.8 荧光免疫层析平台上初筛抗体配对的进一步确认筛选 | 第56页 |
| 3.3.9 抗体对 1G12+H3 在荧光免疫层析平台的临床检测应用 | 第56页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第56-64页 |
| 3.4.1 六株单克隆抗体标记效果的分析 | 第56-57页 |
| 3.4.2 HRP标记抗体工作浓度的确定 | 第57页 |
| 3.4.3 单克隆抗体的双夹心配对在ELISA平台的筛选 | 第57-58页 |
| 3.4.4 荧光标记后抗体活性的测定 | 第58页 |
| 3.4.5 抗体配对在荧光免疫层析平台上的初筛结果 | 第58-59页 |
| 3.4.6 荧光免疫层析平台上初筛抗体配对的进一步确认筛选 | 第59-63页 |
| 3.4.6.1 标准曲线绘制及标准曲线方程的拟合 | 第59-62页 |
| 3.4.6.2 临床标本的检测 | 第62-63页 |
| 3.4.7 抗体对 1G12+H3 在荧光免疫层析平台的临床检测应用 | 第63-64页 |
| 3.5 本章小节 | 第64-66页 |
| 结论和展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附件 | 第73页 |
