| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 棉花轮纹斑病的研究 | 第13-14页 |
| 1.1.1 棉花轮纹斑病的发生与危害 | 第13页 |
| 1.1.2 棉花轮纹斑病的病原菌 | 第13页 |
| 1.1.3 棉花轮纹斑病与棉花早衰之间的关系 | 第13-14页 |
| 1.2 植物与链格孢菌互作致病机制的研究进展 | 第14页 |
| 1.3 香豆素合成途径的研究 | 第14-17页 |
| 1.3.1 香豆素类化合物与植物的生长关系 | 第15页 |
| 1.3.2 香豆素与植物的抗病性 | 第15页 |
| 1.3.3 香豆素合成途径关键酶基因的研究性状 | 第15-17页 |
| 1.4 基因功能的研究—病毒诱导的基因沉默技术 | 第17-19页 |
| 1.5 植物免疫反应的研究 | 第19-20页 |
| 1.5.1 病原相关分子触发的免疫反应 | 第19页 |
| 1.5.2 效应因子触发的免疫反应 | 第19-20页 |
| 1.6 研究目的、意义及内容 | 第20-21页 |
| 1.6.1 研究目的与意义 | 第20页 |
| 1.6.2 具体研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 香豆素合成途径关键酶基因Ghpal、Ghc4h、Gh4cl在棉花中的转录分析 | 第21-26页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验材料和菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 供试培养基 | 第21页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.4 生化试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 供试棉花材料的培养 | 第22页 |
| 2.2.2 供试病原菌的培养 | 第22页 |
| 2.2.3 棉花轮纹斑病菌接种 | 第22页 |
| 2.2.4 棉花叶片RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.5 棉花叶片cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.2.6 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.7 qRT-PCR检测基因Ghpal、Ghc4h、Gh4cl的转录水平 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-25页 |
| 2.3.1 RNA质量的鉴定 | 第24页 |
| 2.3.2 Ghpal、Ghc4h、Gh4cl基因的qRT-PCR分析 | 第24-25页 |
| 2.4 小结 | 第25-26页 |
| 第三章利用VIGS技术研究香豆素合成途径关键酶基因Ghpal、Ghc4h、Gh4cl在棉花抗链格孢菌中的作用 | 第26-37页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 载体和菌株 | 第26页 |
| 3.1.3 供试培养基 | 第26页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第26页 |
| 3.1.5 生化试剂 | 第26-27页 |
| 3.2 试验方法 | 第27-32页 |
| 3.2.1 提取棉花叶片RNA | 第27页 |
| 3.2.2 RNA纯化去DNA | 第27页 |
| 3.2.3 RNA反转录成cDNA | 第27页 |
| 3.2.4 扩增目的片段 | 第27-29页 |
| 3.2.5 目的片段与pMD18-T载体连接和转化 | 第29页 |
| 3.2.6 VIGS沉默载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.2.7 构建成功的VIGS载体转入农杆菌菌株 | 第30-31页 |
| 3.2.8 子叶注射农杆菌接种 | 第31页 |
| 3.2.9 目的基因沉默效率检测 | 第31页 |
| 3.2.10 目的基因沉默植株抗病性检测 | 第31-32页 |
| 3.3 结果与分析 | 第32-36页 |
| 3.3.1 VIGS载体的双酶切验证 | 第32页 |
| 3.3.2 菌落PCR验证构建载体的正确性 | 第32-33页 |
| 3.3.3 pCLCrVA-GhChl I验证VIGS沉默体系 | 第33页 |
| 3.3.4 农杆菌浸染介导的VIGS高效沉默Ghpal、Ghc4h、Gh4cl基因 | 第33-34页 |
| 3.3.5 Ghpal、Ghc4h、Gh4cl基因沉默导致棉花对链格孢菌抗性下降 | 第34-36页 |
| 3.4 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 香豆素对棉花抗链格孢菌影响的研究 | 第37-43页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第37页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第37页 |
| 4.1.2 菌株 | 第37页 |
| 4.1.3 供试培养基 | 第37页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第37页 |
| 4.1.5 生化试剂 | 第37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 棉花材料的种植及目的基因沉默植株的获得 | 第37页 |
| 4.2.2 供试病原菌的培养 | 第37-38页 |
| 4.2.3 香豆素对链格孢菌的生长影响 | 第38页 |
| 4.2.4 侵染点附近荧光物质的检测 | 第38页 |
| 4.2.5 荧光物质提取液对链格孢菌生长的影响 | 第38页 |
| 4.2.6 香豆素对基因沉默植株抗链格孢菌的影响 | 第38-39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-42页 |
| 4.3.1 香豆素对棉花链格孢菌的生长抑制 | 第39-40页 |
| 4.3.2 叶片侵染点附近荧光物质对链格孢菌的生长抑制 | 第40-41页 |
| 4.3.3 外源香豆素恢复基因沉默植株对链格孢菌的抗性 | 第41-42页 |
| 4.4 小结 | 第42-43页 |
| 第五章 讨论 | 第43-45页 |
| 第六章 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
