| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| 1.1 板栗疫病菌与低毒病毒 | 第11-14页 |
| 1.1.1 板栗疫病与板栗疫病菌 | 第11页 |
| 1.1.2 低毒病毒 | 第11-12页 |
| 1.1.3 板栗疫病/板栗疫病菌相互作用的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 丝状真菌的遗传转化方法 | 第14-16页 |
| 1.2.1 聚乙二醇(PEG)-CaCl_2介导原生质体转化 | 第14页 |
| 1.2.2 脂质体转化 | 第14-15页 |
| 1.2.3 限制性内切酶介导转化 | 第15页 |
| 1.2.4 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第15-16页 |
| 1.3 基因功能的研究方法 | 第16-18页 |
| 1.3.1 RNA干扰 | 第16页 |
| 1.3.2 过量表达 | 第16-17页 |
| 1.3.3 基于同源重组的基因敲除 | 第17-18页 |
| 1.4 TRP通道研究背景 | 第18-21页 |
| 1.4.1 离子通道 | 第18页 |
| 1.4.2 TRP通道 | 第18-21页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 细菌菌株 | 第22页 |
| 2.1.1 菌株及培养 | 第22页 |
| 2.1.2 保存与活化 | 第22页 |
| 2.2 真菌菌株 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌株及培养 | 第22页 |
| 2.2.2 保存与活化 | 第22-23页 |
| 2.3 质粒 | 第23页 |
| 2.4 抗生素及使用浓度 | 第23页 |
| 2.5 质粒DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.5.1 质粒DNA的简易提取 | 第23页 |
| 2.5.2 质粒DNA的试剂盒提取 | 第23-24页 |
| 2.6 PCR扩增 | 第24页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.6.2 常规PCR反应 | 第24页 |
| 2.6.3 融合PCR反应 | 第24页 |
| 2.7 构建重组质粒 | 第24-27页 |
| 2.7.1 载体的制备 | 第24-25页 |
| 2.7.2 外源DNA的制备 | 第25-26页 |
| 2.7.3 DNA片段的回收纯化 | 第26-27页 |
| 2.7.4 DNA的连接反应 | 第27页 |
| 2.8 大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化 | 第27页 |
| 2.8.1 感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.8.2 质粒转化感受态细胞 | 第27页 |
| 2.9 真菌原生质体制备及质粒转化 | 第27-28页 |
| 2.9.1 原生质体的制备 | 第27-28页 |
| 2.9.2 质粒转化原生质体 | 第28页 |
| 2.10 真菌总DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.10.1 总DNA的简易提取 | 第28页 |
| 2.10.2 总DNA的大量提取 | 第28-29页 |
| 2.11 低毒病毒dsRNA的提取和纯化 | 第29页 |
| 2.11.1 真菌总RNA的提取 | 第29页 |
| 2.11.2 dsRNA的纯化 | 第29页 |
| 2.12 定量PCR分析 | 第29-30页 |
| 2.12.1 cDNA的第一链合成 | 第29-30页 |
| 2.12.2 荧光定量PCR | 第30页 |
| 2.13 板栗疫病菌基因的Southern杂交分析 | 第30-31页 |
| 2.13.1 基因组总DNA的酶切 | 第30页 |
| 2.13.2 处理凝胶和溶液配制 | 第30页 |
| 2.13.3 转膜与固定 | 第30-31页 |
| 2.13.4 探针的制备 | 第31页 |
| 2.13.5 杂交及免疫检测 | 第31页 |
| 2.14 板栗疫病菌的转染 | 第31-32页 |
| 2.14.1 RNA的体外合成 | 第31-32页 |
| 2.14.2 转染 | 第32页 |
| 2.15 真菌产孢量的检测 | 第32页 |
| 2.16 真菌毒力测试 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-51页 |
| 3.1 50HD09突变位点的验证 | 第33-37页 |
| 3.1.1 插入突变位点PCR验证 | 第33-34页 |
| 3.1.2 插入突变位点功能互补验证 | 第34-37页 |
| 3.2 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体的构建 | 第37-44页 |
| 3.2.1 板栗疫病菌cptrp基因结构分析 | 第37-39页 |
| 3.2.2 低毒病毒对板栗疫病菌cptrp基因表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.3 构建板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体 | 第40-41页 |
| 3.2.4 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体的PCR验证 | 第41-42页 |
| 3.2.5 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体的互补及Southern杂交验证 | 第42-44页 |
| 3.3 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体的生物学研究 | 第44-51页 |
| 3.3.1 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体表型观察 | 第44-46页 |
| 3.3.2 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体产孢量分析 | 第46-47页 |
| 3.3.3 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体影响低毒病毒积累量分析 | 第47-48页 |
| 3.3.4 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体致病力检测 | 第48-49页 |
| 3.3.5 定量PCR分析部分基因的表达量 | 第49-50页 |
| 3.3.6 板栗疫病菌cptrp基因缺失突变体漆酶活性测试 | 第50-51页 |
| 4 讨论与结论 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第61页 |
