| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.1 人诱导多能干细胞关键技术进展 | 第11-12页 |
| 1.2 人诱导多能干细胞的调控机制 | 第12-14页 |
| 1.3 人多能干细胞不同状态之间的相互转换 | 第14-15页 |
| 1.4 人诱导多能干细胞的应用 | 第15-18页 |
| 1.4.1 细胞分化调控 | 第15页 |
| 1.4.2 药物筛选 | 第15-16页 |
| 1.4.3 人遗传疾病的模拟 | 第16页 |
| 1.4.4 再生医学 | 第16-17页 |
| 1.4.5 组织器官发育和生理学 | 第17-18页 |
| 第二章 人胚胎成纤维细胞培养及饲养层细胞的制备 | 第18-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 | 第19页 |
| 2.2.2 小鼠成纤维细胞的分离培养 | 第19页 |
| 2.2.3 STO细胞解冻与传代 | 第19-20页 |
| 2.2.4 小鼠饲养层细胞制备与冻存 | 第20-21页 |
| 2.2.5 人胚胎成纤维细胞的培养 | 第21页 |
| 2.2.6 人胚胎成纤维细胞性别鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.7 人胚胎成纤维细胞支原体检测 | 第22页 |
| 2.2.8 人胚胎成纤维细胞核型分析 | 第22-23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-25页 |
| 2.3.1 小鼠成纤维细胞形态学鉴定 | 第23页 |
| 2.3.2 人胚胎成纤维细胞形态学鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.3 人胚胎成纤维细胞鉴定结果 | 第24-25页 |
| 2.4 讨论及小结 | 第25-26页 |
| 第三章 人诱导多能干细胞系的建立 | 第26-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 主要仪器设备 | 第26页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.2.1 主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 3.3 通过电转染方法将hEF重编程为hiPS细胞 | 第28-29页 |
| 3.4 人诱导多能干细胞+Dox细胞的培养 | 第29-30页 |
| 3.4.1 机械法传代细胞 | 第29页 |
| 3.4.2 酶传消化细胞 | 第29-30页 |
| 3.4.3 碱性磷酸酶染色鉴定 | 第30页 |
| 3.4.4 人诱导多能干细胞+Dox细胞核型检测 | 第30页 |
| 3.5 人诱导多能干细胞有饲养层细胞系的建立 | 第30-32页 |
| 3.5.1 碱性磷酸酶染色鉴定 | 第30页 |
| 3.5.2 外源基因表达检测 | 第30-31页 |
| 3.5.3 实时荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 3.5.4 加饲养层hiPS-ABCL细胞核型检测 | 第32页 |
| 3.6 人诱导多能干细胞无饲养层细胞系的建立 | 第32页 |
| 3.7 人胚胎干细胞复苏培养及诱导 | 第32-33页 |
| 3.8 人诱导多能干细胞无饲养层细胞系得鉴定 | 第33-34页 |
| 3.8.1 人多能干细胞碱性磷酸酶染色鉴定 | 第33页 |
| 3.8.2 人多能干细胞的免疫荧光染色检测 | 第33-34页 |
| 3.8.3 人多能干细胞的实时荧光定量PCR检测 | 第34页 |
| 3.8.4 无饲养层hiPS-ABCL细胞核型检测 | 第34页 |
| 3.9 实验结果 | 第34-42页 |
| 3.9.1 人诱导多能干细胞+Dox细胞系的建立 | 第34-35页 |
| 3.9.2 人诱导多能干细胞有饲养层培养体系的建立 | 第35-36页 |
| 3.9.3 人诱导多能干细胞无饲养层细胞系的建立与鉴定 | 第36-38页 |
| 3.9.4 免疫荧光染色和RT-qPCR结果分析 | 第38-41页 |
| 3.9.5 饲养层细胞的ABCL细胞核型检测结果 | 第41-42页 |
| 3.10 实验讨论及小结 | 第42-43页 |
| 第四章 无饲养层hiPS-ABCL细胞发育潜能研究 | 第43-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 主要仪器设备 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 主要试剂的配制 | 第43页 |
| 4.2.2 无饲养层hiPS-ABCL细胞畸胎瘤制备 | 第43-44页 |
| 4.2.3 tdTomato标记无饲养层hiPS-ABCL细胞系 | 第44页 |
| 4.2.4 无饲养层hiPS-ABCL细胞发育潜能检测 | 第44页 |
| 4.2.5 无饲养层hiPS-ABCL细胞向原始生殖样细胞诱导分化 | 第44页 |
| 4.2.6 PGCLC细胞的免疫荧光染色 | 第44-45页 |
| 4.3 实验结果 | 第45-49页 |
| 4.3.1 畸胎瘤结果分析 | 第45-46页 |
| 4.3.2 td Tomato红色荧光标记hiPS-ABCL细胞结果 | 第46-47页 |
| 4.3.3 无饲养层hiPS-ABCL细胞发育潜能检测 | 第47-48页 |
| 4.3.4 无饲养层hiPS-ABCL细胞向原始生殖样细胞诱导分化 | 第48-49页 |
| 4.4 实验讨论及小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
