| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| 1.1 立题背景及意义 | 第16-17页 |
| 1.2 克罗诺杆菌的分类 | 第17页 |
| 1.3 克罗诺杆菌的生物学特性 | 第17-20页 |
| 1.3.1 形态 | 第17页 |
| 1.3.2 菌落特征 | 第17-18页 |
| 1.3.3 营养要求 | 第18页 |
| 1.3.4 培养条件 | 第18页 |
| 1.3.5 阪崎克罗诺杆菌的耐酸性 | 第18-19页 |
| 1.3.6 生化反应 | 第19-20页 |
| 1.4 克罗诺杆菌在食品及环境中的污染分布 | 第20页 |
| 1.5 克罗诺杆菌的检测方法 | 第20-22页 |
| 1.5.1 经典方法 | 第20-21页 |
| 1.5.2 DFI(Druggan-Forsythe-Iversen)法 | 第21页 |
| 1.5.3 荧光选择性鉴别培养基法 | 第21页 |
| 1.5.4 IDF方法 | 第21页 |
| 1.5.5 阳离子磁性珠快速捕获法 | 第21-22页 |
| 1.6 分子生物学方法 | 第22-23页 |
| 1.6.1 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR) | 第22页 |
| 1.6.2 荧光PCR(Fluorescence PCR) | 第22-23页 |
| 1.7 基因敲除技术 | 第23-25页 |
| 1.7.1 基因敲除的基本原理 | 第23页 |
| 1.7.2 基因敲除的应用 | 第23-24页 |
| 1.7.3 基因敲除的常用技术 | 第24-25页 |
| 1.7.4 基因敲除技术优缺点 | 第25页 |
| 1.8 细菌生物膜 | 第25-26页 |
| 1.9 本论文的目的意义与研究内容 | 第26-28页 |
| 1.9.1 选题研究背景、意义 | 第26-27页 |
| 1.9.2 本课题研究的主要内容 | 第27页 |
| 1.9.3 项目资助 | 第27-28页 |
| 第二章 用于奶粉中克罗诺杆菌分离的改良培养方法 | 第28-39页 |
| 2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第28-29页 |
| 2.1.2 培养基 | 第29页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第29页 |
| 2.1.4 生化试剂与样品 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 克罗诺杆菌的复苏培养 | 第30-32页 |
| 2.2.2 商业婴儿配方奶粉中克罗诺杆菌的分离 | 第32页 |
| 2.2.3 API-20E生化鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.4 阪崎克罗诺杆菌的16S rDNA鉴定 | 第33-35页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第35-38页 |
| 2.3.1 人工模拟污染奶粉中菌体培养 | 第35-36页 |
| 2.3.2 商业婴儿配方奶粉中克罗诺杆菌的分离 | 第36-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 建立一种区分克罗诺杆菌种的分子分型技术 | 第39-48页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 菌株来源 | 第39页 |
| 3.1.2 实验试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 菌株活化 | 第40页 |
| 3.2.2 DNA提取 | 第40页 |
| 3.2.3 gluA、gluB基因扩增 | 第40-42页 |
| 3.2.4 PCR-RFLP | 第42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-47页 |
| 3.3.1 gluA、gluB基因扩增 | 第42-44页 |
| 3.3.2 PCR-RFLP | 第44-47页 |
| 3.4 小结 | 第47-48页 |
| 第四章 阪崎克罗诺杆菌基因敲除的方法建立 | 第48-58页 |
| 4.1 材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 菌株和质粒来源 | 第48页 |
| 4.1.2 实验试剂和仪器 | 第48-49页 |
| 4.2 方法 | 第49-54页 |
| 4.2.1 菌株活化 | 第49页 |
| 4.2.2 DNA提取 | 第49-50页 |
| 4.2.3 扩增同源臂 | 第50-52页 |
| 4.2.4 构建重组载体 | 第52-53页 |
| 4.2.5 同源重组 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-57页 |
| 4.3.1 扩增同源臂 | 第54-55页 |
| 4.3.2 构建重组载体 | 第55-56页 |
| 4.3.3 同源重组 | 第56-57页 |
| 4.4 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 OmpW、GrxB基因的耐酸机制初步探索 | 第58-77页 |
| 5.1 材料 | 第58-59页 |
| 5.1.1 菌株来源 | 第58页 |
| 5.1.2 实验试剂和仪器 | 第58-59页 |
| 5.2 方法 | 第59-62页 |
| 5.2.1 基因敲除 | 第59页 |
| 5.2.2 菌株活化 | 第59页 |
| 5.2.3 野生株、ΔOmpW和ΔGrxB突变菌株前后表型变化 | 第59-62页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第62-75页 |
| 5.3.1 菌落形态变化 | 第62-64页 |
| 5.3.2 细胞形态变化 | 第64-65页 |
| 5.3.3 耐酸性实验 | 第65-70页 |
| 5.3.4 生物膜(Biofilm,BF)变化 | 第70-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第六章 结论与展望 | 第77-80页 |
| 6.1 主要结论 | 第77-78页 |
| 6.2 展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第90页 |
