| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 植物病害与植物病原体 | 第12页 |
| 1.2 黄单胞菌属(Xanthomonas) | 第12-13页 |
| 1.2.1 黄单胞菌属的概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 十字花科黑腐病菌的概述 | 第13页 |
| 1.3 十字花科黑腐病菌致病机理的研究 | 第13-18页 |
| 1.3.1 病原细菌与植物的相互作用模式 | 第14页 |
| 1.3.2 相关的致病生化因子 | 第14-18页 |
| 1.3.2.1 胞外酶 | 第14-15页 |
| 1.3.2.2 胞外多糖 | 第15页 |
| 1.3.2.3 脂多糖 | 第15-16页 |
| 1.3.2.4 微生物毒素 | 第16页 |
| 1.3.2.5 Ⅲ型分泌系统 | 第16-17页 |
| 1.3.2.6 Ⅲ型效应物 | 第17-18页 |
| 1.4 γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA) | 第18页 |
| 1.5 γ-氨基丁酸代谢旁路(GABA shunt) | 第18-20页 |
| 1.5.1 谷氨酸脱羧酶(L-Glu decarboxylase,GAD) | 第19页 |
| 1.5.2 γ-氨基丁酸转氨酶(GABA transaminase) | 第19-20页 |
| 1.5.3 琥珀酸半醛脱氢酶(Succinic semialdehyde dehydrogenase,SSADH) | 第20页 |
| 1.6 γ-氨基丁酸和γ-氨基丁酸代谢旁路的功能 | 第20-22页 |
| 1.6.1 作为能源物质,调节C:N平衡 | 第20页 |
| 1.6.2 调节胞质pH | 第20-21页 |
| 1.6.3 预防抵抗氧爆作用 | 第21页 |
| 1.6.4 渗透调节作用 | 第21页 |
| 1.6.5 信号的转导和防御反应 | 第21-22页 |
| 1.6.6 作为信号分子 | 第22页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.7.1 本研究的目的 | 第22页 |
| 1.7.2 本研究的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-47页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第23-25页 |
| 2.2 本工作所用的引物 | 第25页 |
| 2.3 本工作所用的培养基 | 第25-27页 |
| 2.3.1 培养大肠杆菌的培养基 | 第25-26页 |
| 2.3.2 培养Xcc的培养基 | 第26页 |
| 2.3.3 培养丁香假单胞菌DC3000的培养基 | 第26-27页 |
| 2.4 各菌株的培养条件 | 第27页 |
| 2.5 各菌株的保存条件 | 第27页 |
| 2.6 常用抗生素 | 第27-28页 |
| 2.7 常用试剂、溶液和缓冲液 | 第28-30页 |
| 2.8 细菌核酸的制备 | 第30-31页 |
| 2.8.1 细菌总DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.8.2 细菌质粒的碱裂解法提取 | 第31页 |
| 2.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| 2.10 分子生物学操作 | 第31-34页 |
| 2.10.1 PCR扩增目的DNA片段 | 第31-32页 |
| 2.10.1.1 引物的设计 | 第31-32页 |
| 2.10.1.2 PCR反应 | 第32页 |
| 2.10.2 DNA片段的纯化 | 第32页 |
| 2.10.3 DNA片段的胶回收 | 第32-33页 |
| 2.10.4 DNA片段酶切 | 第33页 |
| 2.10.5 DNA片段连接 | 第33页 |
| 2.10.6 电脉冲转化 | 第33-34页 |
| 2.10.6.1 电脉冲感受态细胞的制备: | 第33-34页 |
| 2.10.6.2 电脉冲转化 | 第34页 |
| 2.11 三亲本接合 | 第34-35页 |
| 2.12 植株实验 | 第35-37页 |
| 2.12.1 致病性试验 | 第35页 |
| 2.12.2 细菌在寄主中叶内的生长繁殖 | 第35-36页 |
| 2.12.3 过敏反应(HR)试验 | 第36页 |
| 2.12.4 腺苷酸环化酶活性的检测 | 第36-37页 |
| 2.13 胞外酶和胞外多糖的检测 | 第37-38页 |
| 2.13.1 胞外蛋白酶的检测 | 第37页 |
| 2.13.2 胞外淀粉酶的检测 | 第37-38页 |
| 2.13.3 胞外纤维素酶的检测 | 第38页 |
| 2.13.4 胞外多糖的平板检测 | 第38页 |
| 2.14 β-葡糖醛酸酶(GUS)活性测定 | 第38-41页 |
| (1) GUS定性检测: | 第39页 |
| ①GUS平板检测: | 第39页 |
| ②GUS的组织染色: | 第39页 |
| (2) GUS定量检测: | 第39-41页 |
| ①菌体的总GUS的检测: | 第39-40页 |
| ②菌体的总GUS和胞外GUS的同时检测: | 第40-41页 |
| 2.15 重组蛋白的诱导表达,纯化 | 第41-42页 |
| 2.16 Ⅲ型诱导培养基中胞外总蛋白和细菌胞质总蛋白的提取 | 第42页 |
| 2.17 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42-43页 |
| 2.18 Western blotting | 第43-44页 |
| 2.19 谷氨酸脱羧酶酶活检测 | 第44页 |
| 2.20 GABA转氨酶酶活检测 | 第44-45页 |
| 2.21 琥珀酸半醛脱氢酶酶活检测 | 第45-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-73页 |
| 3.1 GABA生理功能的研究 | 第47-53页 |
| 3.1.1 GABA对寄主植物满身红萝卜致病性的影响 | 第47页 |
| 3.1.2 GABA对分泌的影响 | 第47-48页 |
| 3.1.3 Xcc中GABA和Glu的含量 | 第48-50页 |
| 3.1.4 GABA不能作为Xcc的C源或N源 | 第50-52页 |
| 3.1.5 GABA抑制Xcc的生长 | 第52页 |
| 3.1.6 GABA不影响Xcc的HR反应 | 第52-53页 |
| 3.2 GABA shunt在Xcc相关酶的鉴定 | 第53-61页 |
| 3.2.1 谷氨酸脱羧酶的检测 | 第54页 |
| 3.2.2 γ-氨基丁酸转氨酶的检测 | 第54-57页 |
| 3.2.2.1 γ-氨基丁酸转氨酶酶活的检测 | 第54-55页 |
| 3.2.2.2 转入丁香假单胞菌的转氨酶基因到Xcc | 第55-57页 |
| 3.2.3 琥珀酸半醛脱氢酶的鉴定 | 第57-61页 |
| 3.2.3.1 XC1780的生物信息学的分析 | 第57-59页 |
| 3.2.3.2 重组蛋白Q1780的分子构建、表达与纯化 | 第59-61页 |
| 3.2.3.3 琥珀酸半醛脱氢酶酶活的检测 | 第61页 |
| 3.3 XC1780功能的研究 | 第61-73页 |
| 3.3.1 构建XC1780多拷贝菌株 | 第61-62页 |
| 3.3.2 突变体互补菌和多拷贝菌株的致病性和叶内生长情况 | 第62-64页 |
| 3.3.3 胞外酶和胞外多糖的平板检测 | 第64-65页 |
| 3.3.4 利用AvrBs1系统和CyaA系统鉴定XC1780是不是Ⅲ型效应物 | 第65-67页 |
| 3.3.5 琥珀酸半醛脱氢酶是一个胞内酶 | 第67-70页 |
| 3.3.6 XC1780与hrpG, hrpX相互之间的调控关系 | 第70-73页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第73-76页 |
| 4.1 关于GABA | 第73-74页 |
| 4.2 关于GABA shunt | 第74-75页 |
| 4.3 关于XC1780 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第84页 |
