| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-23页 |
| 1.1 燃料酒精的研究背景及意义 | 第9-10页 |
| 1.1.1 植物纤维素生产燃料乙醇 | 第9页 |
| 1.1.2 生物乙醇生产的意义 | 第9-10页 |
| 1.2 自然界中乙醇发酵微生物 | 第10-14页 |
| 1.2.1 可直接转化植物纤维素原料生成乙醇的微生物 | 第11-12页 |
| 1.2.2 可发酵木糖生成乙醇的微生物 | 第12-13页 |
| 1.2.3 微生物的木糖代谢途径 | 第13-14页 |
| 1.3 木糖乙醇发酵工程菌株的构建 | 第14-17页 |
| 1.4 木糖还原酶的辅酶偏好性研究 | 第17-19页 |
| 1.5 酿酒酵母工业菌株转化体系 | 第19-21页 |
| 1.5.1 载体的选择 | 第19-20页 |
| 1.5.2 选择标记 | 第20页 |
| 1.5.3 转化方法 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 1.7 本研究的主要技术路线 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-31页 |
| 2.1.1 供试菌种和质粒 | 第23-26页 |
| 2.1.2 扩增引物 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.4 主要分子生物学及生化试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.5 主要缓冲液及试剂配制 | 第28-30页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-54页 |
| 2.2.1 G418 对菌株W5 和E.coli DH5α的最低抑菌浓度测定 | 第31页 |
| 2.2.2 休哈塔假丝酵母HDYXHT-20335 基因组DNA 的提取 | 第31-33页 |
| 2.2.3 xy11、KanR、ADHt 的克隆及测序 | 第33-42页 |
| 2.2.4 重组酿酒酵母整合表达载体pYX-AK-xy11 的构建 | 第42-50页 |
| 2.2.5 转化酿酒酵母 | 第50-51页 |
| 2.2.6 表达重组子的筛选及验证 | 第51页 |
| 2.2.7 蛋白质含量的测定 | 第51-52页 |
| 2.2.8 木糖还原酶酶活的测定 | 第52-53页 |
| 2.2.9 木糖还原酶辅酶偏好性的研究 | 第53页 |
| 2.2.10 转化子稳定性测定 | 第53-54页 |
| 第3章 结果与分析 | 第54-84页 |
| 3.1 G418 对菌株W5 和E.coli DH5α的最低抑菌浓度结果 | 第54页 |
| 3.1.1 G418 对菌株W5 最低抑菌浓度 | 第54页 |
| 3.1.2 G418 对E.coli DH5α最低抑菌浓度 | 第54页 |
| 3.2 休哈塔假丝酵母HDYXHT-20335 基因组DNA 的提取 | 第54-55页 |
| 3.3 xy11、KanR、ADHt 的克隆及测序结果 | 第55-69页 |
| 3.3.1 xy11 的克隆及生物信息学分析 | 第55-61页 |
| 3.3.2 KanR 基因的克隆及测序结果 | 第61-66页 |
| 3.3.3 ADHt 的克隆及测序结果 | 第66-69页 |
| 3.4 酿酒酵母整合表达载体PYX-AK-XYL1 的构建 | 第69-76页 |
| 3.4.1 质粒pYX-ADH 的构建 | 第69-71页 |
| 3.4.2 质粒pYX-AK 的构建 | 第71-74页 |
| 3.4.3 质粒pYX-AK-xy11 的构建 | 第74-76页 |
| 3.5 表达重组子的筛选与鉴定 | 第76-77页 |
| 3.5.1 重组表达载体pYX-AK-xy11 的线性化 | 第76页 |
| 3.5.2 转化子的筛选与鉴定 | 第76-77页 |
| 3.6 木糖还原酶酶活的测定 | 第77-82页 |
| 3.6.1 蛋白质含量的测定 | 第77-78页 |
| 3.6.2 木糖还原酶酶活测定 | 第78-82页 |
| 3.7 重组酿酒酵母的稳定性 | 第82-84页 |
| 第4章 讨论 | 第84-90页 |
| 4.1 目的基因的测序结果分析 | 第84页 |
| 4.2 整合表达载体的构建 | 第84-85页 |
| 4.3 表达载体酶切位点的选择 | 第85-87页 |
| 4.4 酿酒酵母转化体系的研究 | 第87-88页 |
| 4.4.1 受体菌的选择 | 第87页 |
| 4.4.2 转化方法的确立 | 第87-88页 |
| 4.4.3 转化子的筛选 | 第88页 |
| 4.5 木糖还原酶酶活研究 | 第88-89页 |
| 4.6 工作设想 | 第89-90页 |
| 第5章 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 附录1 | 第99-100页 |
| 附录2 | 第100-102页 |
| 附录3 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
