| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-23页 |
| 0.1 禽流感概述 | 第12-16页 |
| 0.1.1 高致病性禽流感对哺乳动物致病力逐渐增强 | 第12-13页 |
| 0.1.2 高致病性禽流感严重威胁人类健康 | 第13页 |
| 0.1.3 禽流感对全球养禽业造成严重的经济损伤 | 第13-15页 |
| 0.1.4 禽流感病毒的结构、形状和化学组成 | 第15-16页 |
| 0.2 NS1 蛋白的简介 | 第16-21页 |
| 0.2.1 NS1 基因的进化及基因同源性分类的研究 | 第16-17页 |
| 0.2.2 NS1 蛋白的结构 | 第17-18页 |
| 0.2.3 NS1 蛋白的功能及国内外研究进展 | 第18-21页 |
| 0.3 筛选与NS1 互作蛋白的意义 | 第21页 |
| 0.4 本项目研究目的及内容 | 第21-23页 |
| 第1章 NS1 蛋白的原核表达、纯化 | 第23-39页 |
| 1.1 前言 | 第23-24页 |
| 1.2 原核表达体系 | 第24-25页 |
| 1.2.1 pET 系列原核表达载体 | 第24-25页 |
| 1.3 材料和试剂 | 第25-28页 |
| 1.4 方法 | 第28-32页 |
| 1.4.1 重组质粒的构建 | 第28-32页 |
| 1.5 诱导表达以及产物的鉴定 | 第32-33页 |
| 1.5.1 诱导表达 | 第32页 |
| 1.5.2 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 1.5.3 考马斯亮蓝染色及脱色 | 第33页 |
| 1.6 目的蛋白的纯化 | 第33-35页 |
| 1.7 结果 | 第35-38页 |
| 1.7.1 PCR 扩增NS1 基因 | 第35页 |
| 1.7.2 重组质粒pET28a-NS1 的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 1.7.3 测序结果 | 第36页 |
| 1.7.4 诱导表达 | 第36-37页 |
| 1.7.5 蛋白的纯化 | 第37页 |
| 1.7.6 纯化蛋白浓度的测定 | 第37-38页 |
| 1.8 讨论 | 第38-39页 |
| 第2章 从人肺细胞CDNA T7 噬菌体文库中筛选与NS1 蛋白相互作用的蛋白 | 第39-55页 |
| 2.1 前言 | 第39页 |
| 2.2 噬菌体展示的基本原理 | 第39-42页 |
| 2.2.1 原理及意义 | 第39-40页 |
| 2.2.2 T7 噬菌体展示系统 | 第40-41页 |
| 2.2.3 噬菌体展示技术的基本流程 | 第41-42页 |
| 2.3 材料和试剂 | 第42页 |
| 2.3.1 菌株 | 第42页 |
| 2.3.2 蛋白质与酶 | 第42页 |
| 2.3.3 引物设计 | 第42页 |
| 2.3.4 主要试剂配制（见附录A） | 第42页 |
| 2.4 实验方法 | 第42-45页 |
| 2.4.1 文库质量的鉴定 | 第42-44页 |
| 2.4.2 cDNA 展示文库的亲和筛选 | 第44-45页 |
| 2.4.3 特异性富集的噬菌体cDNA 插入片段的测序分析 | 第45页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第45-55页 |
| 2.5.1 噬菌体文库筛选的滴度测定 | 第45-46页 |
| 2.5.2 PCR 法鉴定筛选前后噬菌体的cDNA 插入片段 | 第46-48页 |
| 2.5.3 测序及序列对比分析 | 第48-53页 |
| 2.5.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第3章 NOLC1 与NS1 在体内相互作用的鉴定 | 第55-70页 |
| 3.1 材料 | 第55-56页 |
| 3.2 方法 | 第56-65页 |
| 3.2.1 哺乳动物双杂交系统验证NOLC1 和NS1 蛋白相互作用的关系 | 第56-61页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀方法验证NOLC1 和NS1 蛋白相互作用 | 第61-65页 |
| 3.3 结果 | 第65-68页 |
| 3.3.1 哺乳动物双杂交系统验证NOLC1 和NS1 蛋白相互作用的结果 | 第65-67页 |
| 3.3.2 免疫共沉淀验证NOLC1 和NS1 蛋白相互作用的结果 | 第67-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第4章 总结与展望 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 A 试剂及其配制一览表 | 第78-82页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第82-83页 |
