| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 文献综述 | 第14-42页 |
| 第一章 猪瘟及猪瘟病毒研究进展 | 第14-42页 |
| ·猪瘟研究进展 | 第14-29页 |
| ·猪瘟概述 | 第14-15页 |
| ·猪瘟的病原 | 第15页 |
| ·猪瘟的临床症状 | 第15-17页 |
| ·猪瘟的流行病学 | 第17-18页 |
| ·猪瘟的致病机理 | 第18-19页 |
| ·猪瘟的诊断 | 第19-28页 |
| ·猪瘟的防控 | 第28-29页 |
| ·猪瘟病毒研究进展 | 第29-36页 |
| ·猪瘟病毒的基本形态和理化特性 | 第29页 |
| ·病毒的基因型 | 第29-30页 |
| ·猪瘟病毒基因组结构 | 第30-31页 |
| ·病毒主要基因的功能 | 第31-36页 |
| ·猪瘟疫苗研究进展 | 第36-42页 |
| ·传统的CSF 疫苗 | 第36-38页 |
| ·猪瘟基因工程疫苗 | 第38-42页 |
| 试验研究 | 第42-104页 |
| 第二章 干扰猪瘟病毒shimen 株3′-NTR shRNA 表达载体的构建 | 第42-53页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·菌株与质粒 | 第43页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·靶向CSFV 3′-NTR 区段小干扰RNA（siRNA）序列的选取及设计 | 第44-45页 |
| ·编码短发夹RNA（shRNA）序列的DNA 单链设计与合成 | 第45-46页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第46-49页 |
| ·结果 | 第49-51页 |
| ·重组质粒构建模式图 | 第49-51页 |
| ·重组质粒的测序 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第三章 转录靶向CSFV Shimen 株3′-NTR shRNA 细胞株的建立及对CSFV 增殖干扰研究 | 第53-67页 |
| ·材料 | 第53-55页 |
| ·质粒、毒株、菌株和细胞 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-60页 |
| ·重组pGenesil-1 表达质粒的纯化 | 第55-56页 |
| ·重组干扰表达载体转染PK-15 细胞 | 第56-57页 |
| ·稳定转录靶向CSFV Shimen 株3′-NTR shRNA PK-15 细胞株的获得 | 第57页 |
| ·阳性细胞株CSFV 增殖的干扰 | 第57-58页 |
| ·CSFV 增殖干扰效果的检测 | 第58-60页 |
| ·结果 | 第60-65页 |
| ·重组干扰载体的纯化 | 第60页 |
| ·G418 最佳筛选浓度 | 第60-61页 |
| ·G418 筛选及阳性细胞克隆的获得 | 第61页 |
| ·转录靶向CSFV Shimen 株3′-NTR shRNA PK-15 细胞株的获得 | 第61-62页 |
| ·PCR 扩增条件的优化 | 第62-63页 |
| ·CSFV NS3 基因半定量 RT-PCR 检测 | 第63-65页 |
| ·CSFV 病毒粒子的ELISA 检测 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第四章 猪瘟病毒强弱毒株RT-PCR 快速鉴别检测方法研究 | 第67-74页 |
| ·材料 | 第68-69页 |
| ·毒株、质粒和细胞 | 第68页 |
| ·主要试剂和酶 | 第68页 |
| ·临床待检样品 | 第68页 |
| ·主要仪器 | 第68页 |
| ·引物设计与合成 | 第68-69页 |
| ·方法 | 第69-70页 |
| ·病毒RNA 的提取和cDNA 合成 | 第69页 |
| ·PCR | 第69页 |
| ·特异性试验与PCR 产物鉴定 | 第69页 |
| ·临床样品的检测 | 第69-70页 |
| ·结果 | 第70-72页 |
| ·RT-PCR 扩增CSFV 反应条件的确定 | 第70页 |
| ·RT-PCR 对CSFV 强弱毒株的扩增 | 第70-71页 |
| ·PCR 产物鉴定 | 第71页 |
| ·对其他猪源病毒和疑似猪瘟病料的检测 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第五章 猪瘟病毒E2 基因“自杀性”DNA 疫苗的构建及动物免疫试验 | 第74-90页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·毒株、质粒与细胞株 | 第75页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第75页 |
| ·主要仪器 | 第75页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·引物设计和PCR 扩增 | 第75-76页 |
| ·方法 | 第76-83页 |
| ·CSFV Shimen 株E2 基因的克隆与鉴定 | 第76-79页 |
| ·重组自杀性DNA 疫苗表达载体的构建 | 第79-81页 |
| ·重组质粒的细胞转染与E2 蛋白体外表达 | 第81-82页 |
| ·重组质粒免疫小鼠T 细胞增殖检测 | 第82页 |
| ·本动物免疫及抗体测定 | 第82-83页 |
| ·结果 | 第83-88页 |
| ·猪瘟病毒Shimen 株E2 基因的克隆及鉴定 | 第83页 |
| ·以表达引物的PCR 扩增 | 第83页 |
| ·E2 基因重组表达质粒的鉴定 | 第83-86页 |
| ·重组表达质粒体外转染的检测 | 第86页 |
| ·免疫小鼠T 细胞增殖检测 | 第86-87页 |
| ·免疫猪特异性抗体的检测 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第六章 表达CSFV Shimen 株E0 | 第90-104页 |
| ·材料 | 第90-91页 |
| ·毒株、菌株和质粒 | 第90-91页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第91页 |
| ·主要仪器 | 第91页 |
| ·鸡胚和试验动物 | 第91页 |
| ·方法 | 第91-96页 |
| ·引物设计与合成 | 第91-92页 |
| ·含CSFV E0 和E2 基因的鸡痘病毒转移载体的构建 | 第92-94页 |
| ·重组病毒的获得与纯化 | 第94-95页 |
| ·重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 的鉴定 | 第95-96页 |
| ·重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 诱导小鼠的免疫应答 | 第96页 |
| ·重组鸡痘病毒对试验猪的免疫保护试验 | 第96页 |
| ·结果 | 第96-102页 |
| ·CSFV E0、E2 基因的扩增 | 第96-97页 |
| ·含CSFV E0-E2 基因的鸡痘病毒转移载体的鉴定 | 第97页 |
| ·重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 的筛选与纯化 | 第97-98页 |
| ·重组鸡痘病毒FV282-E0-E2 的PCR 鉴定 | 第98-99页 |
| ·FV282-E0-E2 免疫小鼠抗猪瘟血清抗体的检测 | 第99页 |
| ·免疫试验猪的结果 | 第99-102页 |
| ·讨论 | 第102页 |
| ·小结 | 第102-104页 |
| 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 作者简介 | 第119页 |
