| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 综述部分 | 第15-35页 |
| 第一章 乳腺的发育 | 第15-20页 |
| ·乳腺的发育 | 第15页 |
| ·乳腺的细胞组成及其结构 | 第15-17页 |
| ·激素对乳腺发育的调控 | 第17-20页 |
| ·卵巢激素与乳腺发育 | 第17-18页 |
| ·催乳素与乳腺发育 | 第18页 |
| ·生长素与乳腺发育 | 第18-19页 |
| ·其他激素对乳腺发育的影响 | 第19-20页 |
| 第二章 乳腺上皮细胞研究进展 | 第20-25页 |
| ·牛乳腺上皮细胞系的建立 | 第20页 |
| ·乳腺上皮细胞的生长特性与形态学特征 | 第20-21页 |
| ·乳腺上皮细胞分离培养方法 | 第21页 |
| ·乳腺上皮细胞纯化方法 | 第21-22页 |
| ·激素和细胞因子对乳腺上皮细胞的增殖调控 | 第22-23页 |
| ·细胞外基质对乳腺上皮细胞的影响 | 第23-25页 |
| 第三章 乳腺干细胞 | 第25-35页 |
| ·乳腺干细胞的生物学特征 | 第25-30页 |
| ·乳腺干细胞的基本特征 | 第25页 |
| ·乳腺干细胞的自我更新 | 第25-29页 |
| ·Wnt 信号通路 | 第25-27页 |
| ·Notch 信号通路 | 第27-28页 |
| ·Hedgehog 信号通路 | 第28-29页 |
| ·乳腺干细胞的分化 | 第29-30页 |
| ·乳腺干细胞的分离、培养和鉴定 | 第30-33页 |
| ·乳腺干细胞的分离和纯化 | 第30-31页 |
| ·乳腺干细胞的培养 | 第31-32页 |
| ·乳腺干细胞的鉴定 | 第32-33页 |
| ·乳腺干细胞的应用前景及存在的问题 | 第33-35页 |
| ·乳腺干细胞的应用前景 | 第33-34页 |
| ·乳腺干细胞研究存在的问题 | 第34-35页 |
| 试验研究 | 第35-88页 |
| 第四章 乳腺上皮细胞的分离与培养 | 第35-49页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·乳腺上皮细胞的分离与培养 | 第37页 |
| ·乳腺上皮细胞的纯化 | 第37页 |
| ·乳腺上皮细胞的传代培养 | 第37页 |
| ·乳腺上皮细胞生长曲线的绘制 | 第37页 |
| ·乳腺上皮细胞的免疫荧光染色 | 第37-38页 |
| ·乳腺上皮细胞的体外诱导 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-44页 |
| ·乳腺上皮细胞的形态学特征 | 第39-41页 |
| ·乳腺上皮细胞的生长曲线 | 第41-42页 |
| ·不同生长因子对牛乳腺上皮细胞增殖的影响 | 第42页 |
| ·乳腺上皮细胞免疫组织化学染色 | 第42-44页 |
| ·RT-PCR 检测β-酪蛋白的表达 | 第44页 |
| ·Western Blotting 检测β-酪蛋白的表达 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-48页 |
| ·乳腺上皮细胞的分离和纯化 | 第44-45页 |
| ·乳腺上皮细胞的体外培养 | 第45-47页 |
| ·乳腺上皮细胞的鉴定 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第五章 牛乳腺上皮细胞永生化研究 | 第49-73页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·质粒与菌株 | 第49页 |
| ·工具酶和试剂 | 第49页 |
| ·主要试剂的配制 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-56页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒的提取及纯化 | 第50页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒的酶切鉴定 | 第50页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒的大量提取 | 第50页 |
| ·新霉素（G418）筛选浓度的确定 | 第50页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒转染乳腺上皮细胞 | 第50-51页 |
| ·G418 筛选及阳性细胞群的获得 | 第51页 |
| ·生长曲线的测定 | 第51页 |
| ·RT-PCR 检测转染细胞hTERT 的表达 | 第51页 |
| ·乳腺上皮细胞免疫组化染色 | 第51-52页 |
| ·RT-PCR 检测β-酪蛋白的表达 | 第52页 |
| ·Western blotting 检测β-酪蛋白的表达 | 第52页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第52页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第52页 |
| ·染色体核型分析 | 第52-53页 |
| ·透射电镜的观察 | 第53页 |
| ·端粒酶活性检测 | 第53-56页 |
| ·结果 | 第56-68页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒扩增和酶切鉴定 | 第56页 |
| ·pCI-neo-hTERT 质粒纯度和浓度的检测 | 第56-57页 |
| ·G418 对牛乳腺上皮细胞最佳筛选浓度的确定 | 第57页 |
| ·转染后阳性细胞的获得 | 第57页 |
| ·hTERT-BMECs 的形态和特征 | 第57-60页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第60-61页 |
| ·RT-PCR 检测hTERT 基因的表达 | 第61页 |
| ·免疫荧光染色检测hTERT 基因的表达 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR 检测β-酪蛋白的表达 | 第62页 |
| ·Western blotting 检测β-酪蛋白的表达 | 第62页 |
| ·hTERT-BMECs 与BMECs 的细胞周期的比较 | 第62-63页 |
| ·细胞凋亡的检测 | 第63-64页 |
| ·透射电镜观察 | 第64-65页 |
| ·染色体核型分析 | 第65-66页 |
| ·软琼脂实验 | 第66页 |
| ·裸鼠实验 | 第66-67页 |
| ·端粒酶活性检测 | 第67页 |
| ·hTERT-BMECs p14~(ARF)-p53 通路的变化 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-71页 |
| ·牛永生化乳腺上皮细胞系的建立 | 第68-69页 |
| ·转染端粒酶基因对牛乳腺上皮细胞的影响 | 第69-70页 |
| ·hTERT-BMECs p14~(ARF)-p53 通路的变化 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 第六章 乳腺干细胞的分离、培养及鉴定 | 第73-83页 |
| ·材料 | 第73-74页 |
| ·主要仪器 | 第73-74页 |
| ·主要试剂和溶液的配制 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-76页 |
| ·BMSCs 的分离与培养 | 第74页 |
| ·BMSCs 的诱导分化试验 | 第74页 |
| ·乳腺细胞球的免疫荧光染色 | 第74页 |
| ·分化细胞的免疫组化染色 | 第74页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第74-75页 |
| ·Western blot 分析 | 第75-76页 |
| ·结果 | 第76-80页 |
| ·牛乳腺上皮细胞的生长特性 | 第76-77页 |
| ·牛乳腺干细胞的生长特性 | 第77页 |
| ·牛乳腺干细胞体外分化能力鉴定 | 第77-79页 |
| ·牛乳腺干细胞标记物的鉴定 | 第79-80页 |
| ·RT-PCR 检测干性基因 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| ·乳腺干细胞的特征 | 第80-81页 |
| ·乳腺干细胞的自我更新 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82-83页 |
| 第七章 hTERT-BMECs 核移植 | 第83-88页 |
| ·材料 | 第83页 |
| ·卵巢来源 | 第83页 |
| ·试剂仪器 | 第83页 |
| ·方法 | 第83-85页 |
| ·卵母细胞的采集和成熟培养 | 第83-84页 |
| ·卵母细胞的去核操作 | 第84页 |
| ·供体细胞的准备及注核 | 第84页 |
| ·核质复合体的电融合 | 第84页 |
| ·核移植胚胎的激活 | 第84页 |
| ·核移植胚胎的体外培养 | 第84页 |
| ·囊胚差异染色 | 第84-85页 |
| ·统计分析 | 第85页 |
| ·结果 | 第85-86页 |
| ·乳腺上皮细胞永生化对核移植胚胎体外发育的影响 | 第85-86页 |
| ·乳腺上皮细胞永生化对克隆胚细胞数的影响 | 第86页 |
| ·讨论 | 第86-87页 |
| ·供核细胞端粒酶活性与核移植胚胎的发育 | 第86-87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 创新点 | 第89-90页 |
| 进一步研究的课题 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-107页 |
| 缩略词 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
