| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 背景介绍 | 第14-37页 |
| 1 RNA转录与加工的偶联 | 第14-17页 |
| 1.1 转录的阶段与RNAPII的修饰 | 第14页 |
| 1.2 转录复合物对RNA加工因子的招募 | 第14-16页 |
| 1.3 非编码RNA对转录的调控 | 第16-17页 |
| 2 SR蛋白的介绍 | 第17-26页 |
| 2.1 SR蛋白的特点和种类 | 第17页 |
| 2.2 SR蛋白的结构 | 第17-19页 |
| 2.3 SR蛋白的修饰 | 第19-20页 |
| 2.4 SR蛋白的功能 | 第20-26页 |
| 2.4.1 SR蛋白在剪切中的作用 | 第21-22页 |
| 2.4.2 SR蛋白促进NMD | 第22页 |
| 2.4.3 SR蛋白促进RNA的转运 | 第22-23页 |
| 2.4.4 SR促进细胞质中的翻译 | 第23页 |
| 2.4.5 SR蛋白保持基因组的稳定性 | 第23-26页 |
| 2.4.6 SR蛋白在核内介导基因调控网络 | 第26页 |
| 3 HNRNP蛋白介绍 | 第26-29页 |
| 3.1 hnRNP蛋白的发现 | 第26-27页 |
| 3.2 hnRNP蛋白的结构 | 第27-28页 |
| 3.3 hnRNP蛋白总体特点和功能 | 第28-29页 |
| 3.4 hnRNP蛋白对转录的调节 | 第29页 |
| 4 HIV与转录激活 | 第29-35页 |
| 4.1 HIV的Tat蛋白依赖性的转录激活 | 第29-30页 |
| 4.2 Tat蛋白与TAR RNA的结合是转录激活的关键 | 第30-32页 |
| 4.2.1 Tat蛋白的修饰对转录活性的调节 | 第31-32页 |
| 4.3 7SK核酸蛋白复合物：P-TEFb的储蓄池 | 第32-33页 |
| 4.4 Tat蛋白把P-TEFb复合物从7SK复合物中释放出来 | 第33-34页 |
| 4.5 Tat蛋白进一步形成超级延伸复合物(SEC)激活转录 | 第34-35页 |
| 5 SRSF2蛋白采取与TAT蛋白相似的机制促进转录 | 第35-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-67页 |
| 1 实验材料 | 第37-46页 |
| 1.1 菌株 | 第37页 |
| 1.2 细胞系 | 第37页 |
| 1.3 质粒 | 第37-38页 |
| 1.4 抗体及免疫试剂 | 第38页 |
| 1.5 生化试剂 | 第38-39页 |
| 1.6 耗材 | 第39-40页 |
| 1.7 印迹膜 | 第40页 |
| 1.8 细胞生物学试剂 | 第40页 |
| 1.9 分子生物学试剂 | 第40-41页 |
| 1.10 本研究所用引物列表 | 第41-44页 |
| 1.10.1 克隆引物 | 第41-44页 |
| 1.10.2 RT-QPCR引物 | 第44页 |
| 1.10.4 测序引物 | 第44页 |
| 1.11 分析绘图软件 | 第44-45页 |
| 1.12 仪器 | 第45-46页 |
| 2 溶液配制 | 第46-51页 |
| 2.1 PBS溶液 | 第46页 |
| 2.2 DMEM培养基 | 第46-47页 |
| 2.3 细胞冻存液 | 第47页 |
| 2.4 细胞培养用0.25%胰酶 | 第47页 |
| 2.5 抗生素溶液 | 第47-48页 |
| 2.6 LB培养基和平板 | 第48页 |
| 2.7 DEPC处理水 | 第48页 |
| 2.8 RNA用70%乙醇 | 第48页 |
| 2.9 50×TAE缓冲液 | 第48-49页 |
| 2.10 1%-2.5%琼脂糖溶液 | 第49页 |
| 2.11 30%丙烯酰胺 | 第49页 |
| 2.12 1M pH6.8 Tris-HCl缓冲液和1.5M pH8.8 Tris-HCl缓冲液 | 第49页 |
| 2.13 10%SDS和10%APS溶液 | 第49-50页 |
| 2.14 TBST洗脱缓冲液及封闭缓冲液 | 第50页 |
| 2.15 5×SDS电泳缓冲液 | 第50页 |
| 2.16 5×SDS电泳上样缓冲液 | 第50页 |
| 2.17 转膜缓冲液 | 第50-51页 |
| 3 实验方法 | 第51-67页 |
| 3.1 质粒构建 | 第51-56页 |
| 3.1.1 感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 3.1.2 pEGFP-MS2表达载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.1.3 pEGFP-MS2-RBP融合蛋白表达载体的构建 | 第53-55页 |
| 3.1.4 带有MS2结合位点的荧光素酶报告系统的建立 | 第55页 |
| 3.1.5 突变体克隆的建立 | 第55-56页 |
| 3.2 细胞培养和转染 | 第56-59页 |
| 3.2.1 冻存细胞的复苏 | 第56-57页 |
| 3.2.2 细胞的保藏 | 第57页 |
| 3.2.3 细胞转染前对多孔细胞培养板的处理 | 第57-58页 |
| 3.2.4 Lipofectamine 2000转染 | 第58-59页 |
| 3.2.5 Turbofect转染 | 第59页 |
| 3.3 荧光素酶活性测定 | 第59-60页 |
| 3.4 mRNA水平变化的检测 | 第60-63页 |
| 3.4.1 TRIzol提取总RNA | 第60-61页 |
| 3.4.2 DNA酶处理和逆转录 | 第61-62页 |
| 3.4.3 定量PCR | 第62页 |
| 3.4.4 PCR检测mRNA剪切效率的改变 | 第62-63页 |
| 3.5 免疫印记 | 第63-67页 |
| 3.5.1 配制SDS-PAGE | 第63-64页 |
| 3.5.2 蛋白样品制备和电泳 | 第64-65页 |
| 3.5.3 转膜 | 第65页 |
| 3.5.4 杂交 | 第65-67页 |
| 第三章 实验结果 | 第67-88页 |
| 1 为研究不同RNA结合蛋白功能而构建MS2拖拽系统 | 第67-69页 |
| 2 SRSF2蛋白的核滞留序列(NRS)对转录激活作用的影响 | 第69-72页 |
| 3 SRSF2蛋白转录激活作用需要的结构域 | 第72-75页 |
| 4 系统性的比较SR蛋白家族和HNRNP蛋白家族的不同作用 | 第75-82页 |
| 5 SR蛋白和HNRNP蛋白在RNA转录和转录后控制上的位置效应 | 第82-88页 |
| 第四章 讨论 | 第88-92页 |
| 参考文献 | 第92-103页 |
| 攻博期间发表的科研成果 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
