| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-28页 |
| 1 国内外水产养殖及病原菌爆发状况 | 第15-16页 |
| 2 水产养殖病原微生物治疗与防治措施 | 第16-23页 |
| 2.1 抗生素 | 第16-17页 |
| 2.1.1 抗生素的滥用 | 第16-17页 |
| 2.1.2 抗生素的滥用的危害 | 第17页 |
| 2.2 渔药抗生素与耐药性 | 第17-18页 |
| 2.3 疫苗的相关研究 | 第18-19页 |
| 2.3.1 疫苗的出现 | 第18-19页 |
| 2.3.2 疫苗的发展时期 | 第19页 |
| 2.3.3 现代疫苗发展时期 | 第19页 |
| 2.4 鱼类疫苗的种类与研究进展 | 第19-22页 |
| 2.4.1 传统疫苗 | 第20-21页 |
| 2.4.2 新型疫苗 | 第21-22页 |
| 2.5 当前鱼用疫苗研发的困难与瓶颈 | 第22-23页 |
| 3 嗜水气单胞菌的危害与疫苗防治措施 | 第23-26页 |
| 3.1 嗜水气单胞菌危害 | 第23页 |
| 3.2 嗜水气单胞疫苗研究 | 第23-25页 |
| 3.2.1 嗜水气单胞菌传统疫苗研究 | 第23-24页 |
| 3.2.2 外膜蛋白亚单位疫苗 | 第24-25页 |
| 3.3 铁载体相关免疫 | 第25-26页 |
| 4 本论文主要研究内容及其生物学意义 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-42页 |
| 1 材料 | 第28-32页 |
| 1.1 生物材料 | 第28页 |
| 1.1.1 实验用菌种 | 第28页 |
| 1.1.2 实验用鼠 | 第28页 |
| 1.1.3 模式生物斑马鱼 | 第28页 |
| 1.1.4 载体 | 第28页 |
| 1.2 试剂材料与来源 | 第28-29页 |
| 1.3 实验设备 | 第29-30页 |
| 1.4 试剂的配置 | 第30-32页 |
| 1.4.1 月桂酰肌氨酸钠不溶性蛋白提取和质谱分析试剂配制 | 第30页 |
| 1.4.2 分子生物学相关试剂配制 | 第30页 |
| 1.4.3 细菌培养相关试剂配制 | 第30-31页 |
| 1.4.4 SDS-PAGE电泳缓冲液试剂配制 | 第31页 |
| 1.4.5 抗体效价检测相关试剂配制 | 第31页 |
| 1.4.6 蛋白纯化相关试剂配制 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-42页 |
| 2.1 细菌培养 | 第32页 |
| 2.2 月桂酰肌氨酸钠不溶性蛋白的提取 | 第32页 |
| 2.3 蛋白浓度测定 | 第32-33页 |
| 2.4 蛋白酶解 | 第33页 |
| 2.5 肽段标记 | 第33页 |
| 2.6 LC-Orbitrap质谱鉴定 | 第33-34页 |
| 2.7 蛋白胶内酶解 | 第34页 |
| 2.8 LC-LTQ XL质谱检测 | 第34-35页 |
| 2.9 生物信息学数据分析 | 第35页 |
| 2.10 分子生物学相关实验方法 | 第35-38页 |
| 2.10.1 PCR | 第35-36页 |
| 2.10.2 质粒提取 | 第36页 |
| 2.10.3 核酸产物纯化 | 第36-37页 |
| 2.10.4 限制性内切酶酶切 | 第37页 |
| 2.10.5 连接转化 | 第37-38页 |
| 2.10.6 菌液PCR | 第38页 |
| 2.11 包涵体蛋白纯化实验方法 | 第38-39页 |
| 2.11.1 包涵体蛋白纯化 | 第38-39页 |
| 2.11.2 复性 | 第39页 |
| 2.12 Western blotting | 第39-40页 |
| 2.13 ELISA测定小鼠血清效价 | 第40页 |
| 2.14 斑马鱼和小鼠的养殖 | 第40-41页 |
| 2.14.1 斑马鱼 | 第40页 |
| 2.14.2 实验小白鼠 | 第40-41页 |
| 2.15 小鼠血清获取与斑马鱼免疫 | 第41-42页 |
| 2.15.1 小鼠血清获取 | 第41页 |
| 2.15.2 斑马鱼半数致死量测定 | 第41页 |
| 2.15.3 斑马鱼蛋白免疫 | 第41页 |
| 2.15.4 斑马鱼攻毒 | 第41-42页 |
| 第三章 嗜水气单胞菌铁离子限制下差异外膜蛋白组学研究 | 第42-76页 |
| 第一节 正常和缺铁状态下外膜蛋白质组学比较 | 第42-62页 |
| 1 引言 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-61页 |
| 2.1 正常和缺铁状态下月桂酰肌氨酸钠不溶性蛋白的提取 | 第42-43页 |
| 2.2 质谱数据质量分析 | 第43-45页 |
| 2.3 月桂酰肌氨酸钠不溶组分蛋白质谱检测 | 第45-49页 |
| 2.4 差异蛋白生物信息学分析 | 第49-58页 |
| 2.4.1 差异蛋白Domain分析 | 第49-50页 |
| 2.4.2 差异蛋白GO与KEGG分析 | 第50-58页 |
| 2.5 基因功能注释分析 | 第58-60页 |
| 2.6 差异蛋白之间的相互作用分析 | 第60-61页 |
| 3 小结 | 第61-62页 |
| 第二节 正常和缺铁状态下OMPs差异蛋白验证 | 第62-76页 |
| 1 引言 | 第62页 |
| 2 原核表达载体构建 | 第62-64页 |
| 2.1 引物设计 | 第62-63页 |
| 2.2 原核表达载体构建 | 第63-64页 |
| 3 蛋白纯化与抗体制备 | 第64-66页 |
| 4 LC-LTQ XL质谱鉴定 | 第66-67页 |
| 5 Western blotting分析 | 第67-68页 |
| 6 斑马鱼免疫实验 | 第68-71页 |
| 6.1 半数致死量测定 | 第68-69页 |
| 6.2 外膜蛋白组分免疫保护性实验 | 第69-70页 |
| 6.3 铁载体受体相关蛋白免疫保护性实验 | 第70-71页 |
| 7 讨论 | 第71-76页 |
| 总结与展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 硕士研究生期间发表的论文 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
