| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第12-20页 |
| 1 GRAS基因定位 | 第12页 |
| 2 GRAS蛋白结构 | 第12-13页 |
| 3 GRAS蛋白的分类 | 第13-15页 |
| 4 GRAS家族的功能 | 第15-20页 |
| 4.1 GRAS基因与植物生长发育的关系 | 第15-17页 |
| 4.2 GRAS基因参与赤霉素信号转导 | 第17页 |
| 4.3 GRAS基因与光敏色素A信号转导 | 第17-18页 |
| 4.4 GRAS基因与植物抗病及胁迫 | 第18-20页 |
| 植物适应干旱和盐胁迫的类型 | 第20-22页 |
| 海马齿研究简述 | 第22-23页 |
| 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 本研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 一 SpSCL1基因克隆与生物信息学分析 | 第25-36页 |
| 1 实验材料与方法 | 第25-32页 |
| 1.1 实验材料 | 第25页 |
| 1.2 方法 | 第25-29页 |
| 1.2.1 海马齿RNA的提取 | 第25页 |
| 1.2.2 RACE-cDNA第一链的合成 | 第25-26页 |
| 1.2.3 引物的设计与合成 | 第26页 |
| 1.2.4 SpSCL1 3’RACE的PCR扩增 | 第26-27页 |
| 1.2.5 PCR产物回收 | 第27页 |
| 1.2.6 目的片段加尾 | 第27-28页 |
| 1.2.7 目的片段与T载体的连接 | 第28页 |
| 1.2.8 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 1.2.9 转化 | 第28-29页 |
| 1.2.10 重组子的鉴定与测序 | 第29页 |
| 1.3 SpSCL1 5’RACE扩增 | 第29-30页 |
| 1.3.1 引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| 1.3.2 SpSCL1 5’RACE的PCR扩增 | 第30页 |
| 1.4 SpSCL1全长基因扩增 | 第30-32页 |
| 1.4.1 引物的设计与合成 | 第30-31页 |
| 1.4.2 SpSCL1全长基因PCR扩增 | 第31页 |
| 1.4.3 T载质粒的提取 | 第31页 |
| 1.4.4 SpSCL1-T载质粒酶切验证 | 第31-32页 |
| 2、实验结果 | 第32-35页 |
| 2.1 基因的克隆与特征分析 | 第32-34页 |
| 2.2 克隆基因的聚类分析 | 第34-35页 |
| 3、讨论 | 第35-36页 |
| 二 SPSCL1启动子扩增 | 第36-44页 |
| 1 实验材料与方法 | 第36-39页 |
| 1.1 实验材料 | 第36页 |
| 1.2 方法 | 第36-39页 |
| 1.2.1 基因组DNA的获取 | 第36-37页 |
| 1.2.2 特异性引物的设计 | 第37页 |
| 1.2.3 第一轮PCR反应 | 第37-38页 |
| 1.2.4 第二轮PCR反应 | 第38页 |
| 1.2.5 第三轮PCR反应 | 第38-39页 |
| 1.2.6 取第三轮PCR产物5μl,进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第39页 |
| 1.2.7 第三轮PCR产物回收 | 第39页 |
| 2. 结果分析 | 第39-42页 |
| 2.1 SpSCL1启动子序列克隆 | 第39-40页 |
| 2.2 SpSCL1启动子序列分析 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-44页 |
| 三 SpSCL1基因的表达分析 | 第44-49页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 1.1 实验所需试剂或药品 | 第44页 |
| 1.2 材料处理 | 第44-45页 |
| 1.3 半定量RT-PCR引物 | 第45页 |
| 1.4 PCR扩增平台期的确定 | 第45-46页 |
| 1.5 各处理水平下基因的RT-PCR分析 | 第46页 |
| 2、结果 | 第46-48页 |
| 2.1 RNA检测 | 第46-47页 |
| 2.2 PCR扩增平台期的确定 | 第47页 |
| 2.3 SpSCL1基因的表达分析 | 第47-48页 |
| 2.3.1 SpSCL1基因的器官特异表达 | 第47页 |
| 2.3.2 盐处理对SpSCL1基因表达的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.3 干旱处理对SpSCL1基因表达的影响 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 四 SpSCL1基因酵母表达 | 第49-59页 |
| 1、实验材料 | 第49-51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| 2.1 酵母载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.1.1 用于酵母载体构建的SpSCL1基因开放阅读框的扩增 | 第51页 |
| 2.1.2 酵母质粒以及SpSCL1 T载质粒的酶切 | 第51-52页 |
| 2.1.3 SpSCL1酵母表达载体的酶切验证 | 第52页 |
| 2.2 毕赤酵母电转化 | 第52-54页 |
| 2.2.1 酵母感受态细胞的制备 | 第52页 |
| 2.2.2 转化 | 第52-53页 |
| 2.2.3 遗传霉筛选 | 第53页 |
| 2.2.4 酵母耐盐实验 | 第53-54页 |
| 3、实验结果 | 第54-58页 |
| 3.1 SpSCL1基因开放阅读框的扩增及载体构建 | 第54页 |
| 3.2 SpSCL1基因酵母转化的验证 | 第54-55页 |
| 3.3 酵母耐盐实验 | 第55-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 五 SpSCL1基因转基因分析 | 第59-71页 |
| 1、实验材料 | 第59-60页 |
| 1.1 试剂 | 第59页 |
| 1.2 培养基 | 第59-60页 |
| 2、方法 | 第60-65页 |
| 2.1 植物表达载体pCAMBIA-1304-SpSCL1的构建 | 第60-61页 |
| 2.1.1 用于植物表达载体构建的SpSCL1基因开放阅读框的扩增 | 第60页 |
| 2.1.2 pCAMBIA-1304质粒以及SpSCL1-T载质粒的酶切 | 第60-61页 |
| 2.1.3 SpSCL1植物表达载体的酶切验证 | 第61页 |
| 2.2 农杆菌(GV3101)感受态细胞的制备 | 第61-62页 |
| 2.3 电转化 | 第62页 |
| 2.4 烟草无菌苗的准备 | 第62页 |
| 2.5 农杆菌的准备 | 第62-63页 |
| 2.6 侵染及转基因植株的培养 | 第63-64页 |
| 2.7 转基因烟草的检测 | 第64页 |
| 2.8 转基因烟草的的培养 | 第64-65页 |
| 2.9 转基因烟草的耐盐耐旱实验 | 第65页 |
| 2.9.1 阳性烟草植株对盐胁迫的抗性研究 | 第65页 |
| 2.9.2 阳性烟草植株对干旱胁迫的抗性研究 | 第65页 |
| 3、实验结果 | 第65-69页 |
| 3.1 植物表达载体pCAMBIA-1304-SpSCL1的酶切鉴定 | 第65-66页 |
| 3.2 转基因烟草苗的获得 | 第66-67页 |
| 3.3 转基因烟草苗的耐盐分析 | 第67页 |
| 3.4 转基因烟草苗的耐旱分析 | 第67-69页 |
| 4. 讨论 | 第69-71页 |
| 六 总结与结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
