| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第9-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 布鲁氏菌脂多糖的研究进展及疫苗的相关研究 | 第14-26页 |
| 1 布鲁氏菌LPS | 第14-16页 |
| 1.1 类脂A | 第15页 |
| 1.2 核心多糖 | 第15页 |
| 1.3 O-抗原 | 第15-16页 |
| 2 布鲁氏菌LPS相关基因 | 第16-21页 |
| 2.1 Gmd基因 | 第17页 |
| 2.2 HtrB基因 | 第17页 |
| 2.3 KdsA基因、KdsB基因 | 第17-18页 |
| 2.4 LpsB基因 | 第18页 |
| 2.5 LpxA基因、LpxB基因、LpxC基因、LpxD基因、LpxK基因 | 第18页 |
| 2.6 ManA基因、manB基因、manC基因 | 第18-19页 |
| 2.7 PerA基因 | 第19页 |
| 2.8 Pgm基因 | 第19页 |
| 2.9 Pmm基因 | 第19页 |
| 2.10 WbdA基因 | 第19页 |
| 2.11 WbkA基因、WbkB基因、WbkC基因、WbkD基因、WbkE基因、WbkF基因 | 第19-20页 |
| 2.12 WboA基因、WboB基因 | 第20页 |
| 2.13 WbpW基因 | 第20-21页 |
| 2.14 Wzm基因、wzt基因 | 第21页 |
| 3 布鲁氏菌LPS与布鲁氏菌病的致病机理 | 第21-22页 |
| 4 布鲁氏菌相关疫苗 | 第22-24页 |
| 4.1 布鲁氏菌主要弱毒疫苗 | 第22-24页 |
| 4.2 布鲁氏菌新型疫苗相关研究状况 | 第24页 |
| 5 小结 | 第24-26页 |
| 第二章 实验部分 | 第26-126页 |
| 实验一 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA基因和WbkE基因的原核表达鉴定及生物信息学分析 | 第26-62页 |
| 1 材料与方法 | 第27-39页 |
| 1.1 材料 | 第27-28页 |
| 1.2 方法 | 第28-39页 |
| 2 结果 | 第39-59页 |
| 2.1 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA基因的PCR扩增 | 第39页 |
| 2.2 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbkE基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 2.3 WbdA基因和WbkE基因连T载体重组质粒的构建 | 第40-43页 |
| 2.4 WbdA基因和WbkE基因连表达载体重组质粒的构建 | 第43-45页 |
| 2.5 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA和WbkE连表达载体DE3菌液PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 2.6 WbdA蛋白和WbkE蛋白的诱导表达 | 第46-48页 |
| 2.7 WbdA蛋白和WbkE蛋白的表达形式的确定 | 第48-49页 |
| 2.8 WbdA蛋白和WbkE蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 2.9 Western Blot验证WbdA蛋白和WbkE蛋白 | 第50页 |
| 2.10同源性分析 | 第50-51页 |
| 2.11 WbdA蛋白和WbkE蛋白的跨膜区分析 | 第51-52页 |
| 2.12 WbdA蛋白和WbkE蛋白的信号肽预测 | 第52-53页 |
| 2.13 WbdA蛋白和WbkE蛋白的抗原决定簇预测 | 第53-55页 |
| 2.14 WbdA蛋白和WbkE蛋白的二级结构预测 | 第55-57页 |
| 2.15 WbdA蛋白和WbkE蛋白的三级结构预测 | 第57-58页 |
| 2.16 WbdA蛋白和WbkE蛋白的 3D模型评价 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| 3.1 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA蛋白和WbkE蛋白的表达及生物信息学分析 | 第59-62页 |
| 实验二 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA、ΔWbkE缺失株的构建 | 第62-100页 |
| 1 材料与方法 | 第62-77页 |
| 1.1 材料 | 第62-63页 |
| 1.2 方法 | 第63-77页 |
| 2 结果 | 第77-98页 |
| 2.1 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA基因上、下游同源臂的PCR扩增 | 第77-78页 |
| 2.2 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbkE基因上、下游同源臂的PCR扩增 | 第78-79页 |
| 2.3 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA基因上、下游同源臂的融合PCR扩增 | 第79-80页 |
| 2.4 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbkE基因上、下游同源臂的融合PCR扩增 | 第80-81页 |
| 2.5 SacB基因的PCR扩增 | 第81-82页 |
| 2.6 WbdA基因融合产物和WbkE基因融合产物连T载体重组质粒的构建 | 第82-84页 |
| 2.7 SacB基因连T载体重组质粒的构建 | 第84-85页 |
| 2.8 WbdA基因融合产物和WbkE基因融合产物连自杀载体重组质粒的构建 | 第85-87页 |
| 2.9 SacB基因菌液PCR鉴定 | 第87-88页 |
| 2.10 WbdA基因融合产物和WbkE基因融合产物连自杀载体及SacB基因重组质粒的验证 | 第88-90页 |
| 2.11 WbdA基因融合产物和WbkE基因融合产物连自杀载体及SacB基因重组质粒的DH5α的 5%蔗糖筛选 | 第90-91页 |
| 2.12 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA和ΔWbkE缺失株的筛选 | 第91-93页 |
| 2.13 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA和ΔWbkE缺失株的菌液PCR鉴定 | 第93-95页 |
| 2.14 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA和ΔWbkE缺失株的稳定性遗传检测 | 第95-97页 |
| 2.15 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA和ΔWbkE缺失株的生长曲线测定 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98-100页 |
| 3.1 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA基因与WbkE基因的筛选 | 第98页 |
| 3.2 电转化效率的优化 | 第98页 |
| 3.3 羊种布鲁氏菌新疆流行株ΔWbdA和ΔWbkE缺失株的生长特性 | 第98-100页 |
| 实验三 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA缺失株和 ΔWbkE缺失株的毒力评价 | 第100-116页 |
| 1 材料与方法 | 第101-106页 |
| 1.1 材料 | 第101-102页 |
| 1.2 方法 | 第102-106页 |
| 2 结果 | 第106-113页 |
| 2.1 小鼠巨噬细胞RAW264.7 的侵染 | 第106-107页 |
| 2.2 免疫后小鼠脾脏指数的测定 | 第107-109页 |
| 2.3 免疫后小鼠脾脏CFU计数 | 第109-110页 |
| 2.4 Western Blot分析 | 第110-111页 |
| 2.4 布鲁氏菌虎红平板凝集试验(RBPT)结果 | 第111-112页 |
| 2.5 布鲁氏菌试管凝集试验(SAT)结果 | 第112-113页 |
| 3 讨论 | 第113-116页 |
| 3.1 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA缺失株和 ΔWbkE缺失株的毒力分析 | 第113-114页 |
| 3.2 羊种布鲁氏菌新疆流行株WbdA基因和WbkE基因的反应原性分析 | 第114页 |
| 3.3 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA缺失株和 ΔWbkE缺失株的诊断检测分析 | 第114-116页 |
| 实验四 羊种布鲁氏菌新疆流行株 ΔWbdA缺失株和 ΔWbkE缺失株的免疫评价 | 第116-126页 |
| 1 材料与方法 | 第117-119页 |
| 1.1 材料 | 第117页 |
| 1.2 方法 | 第117-119页 |
| 2 结果 | 第119-125页 |
| 2.1 攻毒后小鼠脾脏指数的测定 | 第119-120页 |
| 2.2 攻毒后小鼠脾脏CFU计数 | 第120-121页 |
| 2.3 小鼠IgG ELISA检测试剂盒标准样品标准曲线的绘制 | 第121-122页 |
| 2.4 实验小鼠体液水平检测结果 | 第122-123页 |
| 2.5 小鼠IFN-γELISA检测试剂盒标准样品标准曲线的绘制 | 第123-124页 |
| 2.6 实验小鼠细胞水平检测结果 | 第124-125页 |
| 3 讨论 | 第125-126页 |
| 3.1 体液免疫水平分析及攻毒后分析 | 第125页 |
| 3.2 细胞免疫水平分析及攻毒后分析 | 第125-126页 |
| 第三章 全文结论 | 第126-128页 |
| 创新点 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-140页 |
| 致谢 | 第140-142页 |
| 作者简介 | 第142-144页 |
| 附件 | 第144页 |
