| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| ·微生物表面展示体系研究进展 | 第14-23页 |
| ·噬菌体表面展示体系 | 第15-16页 |
| ·细菌表面展示体系 | 第16-17页 |
| ·酵母表面展示体系 | 第17-22页 |
| ·毕赤酵母表面展示体系介绍 | 第22-23页 |
| ·脂肪酶研究进展 | 第23-28页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第24-25页 |
| ·米黑根毛霉脂肪酶的研究进展 | 第25-27页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶B 研究进展 | 第27-28页 |
| ·本课题的意义与内容 | 第28-29页 |
| 第二章 利用Sed1p 锚定蛋白的米黑根毛霉脂肪酶的毕赤酵母表面展示 | 第29-51页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料与设备 | 第29-34页 |
| ·主要仪器与设备 | 第29-30页 |
| ·菌株和质粒子 | 第30页 |
| ·试剂、抗体与分子克隆工具酶 | 第30-32页 |
| ·培养基与溶液 | 第32-34页 |
| ·实验流程 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-42页 |
| ·毕赤酵母表面展示载体的构建 | 第35-39页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞制备及转化 | 第39-41页 |
| ·毕赤酵母表面展示脂肪酶的荧光分析 | 第41-42页 |
| ·脂肪酶酶活力测定 | 第42页 |
| ·实验结果与讨论 | 第42-49页 |
| ·米黑根毛霉脂肪酶的毕赤酵母表面展示载体的构建 | 第42-45页 |
| ·展示载体pKRML-Sed1 的线性化 | 第45页 |
| ·米黑根毛霉脂肪酶表面展示载体pKRML-Sed1 转化酵母 | 第45-46页 |
| ·毕赤酵母重组菌株产脂肪酶RML 的发酵与诱导表达 | 第46-48页 |
| ·毕赤酵母重组菌株产脂肪酶表面展示荧光分析 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 潜在的毕赤酵母GPI 蛋白的预测与鉴定与展示体系构建 | 第51-70页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·主要仪器与设备 | 第52页 |
| ·菌株和质粒 | 第52页 |
| ·主要试剂与分子克隆用酶 | 第52页 |
| ·培养基与溶液的配置 | 第52页 |
| ·相关软件与网站 | 第52-53页 |
| ·技术路线 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·潜在GPI 的生物信息学分析 | 第54页 |
| ·基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的构建、提取、鉴定与毕赤酵母转化 | 第55页 |
| ·细胞壁蛋白的抽提与去糖基化 | 第55-56页 |
| ·SDS-PAGE 法和Western Blot 法分析 | 第56页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取 | 第56-57页 |
| ·实验结果与讨论 | 第57-62页 |
| ·Gcw14p 的预测 | 第57-59页 |
| ·重组载体构建示意图 | 第59-62页 |
| ·菌株G5115／pKGcw14 的构建与鉴定 | 第62-64页 |
| ·重组菌株G5115／pKGcw14 的构建 | 第62页 |
| ·重组菌株G5115/pKGcw14 的表面荧光分析 | 第62-64页 |
| ·重组菌株G5115/pKGcw14 壁蛋白的抽提与分析 | 第64页 |
| ·Gcw14 型毕赤酵母展示体系的构建 | 第64-68页 |
| ·展示载体pKCALB-Gcw14 转化毕赤酵母 | 第64-65页 |
| ·毕赤酵母重组菌株的发酵与诱导表达 | 第65-66页 |
| ·重组菌株G5115/pKCALB-Gcw14 的表面荧光分析 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-70页 |
| 第四章 毕赤酵母展示脂肪酶在非水相中的评价 | 第70-76页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·实验设备与材料 | 第71-72页 |
| ·实验设备 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-73页 |
| ·毕赤酵母表面展示全细胞催化剂的制备 | 第72页 |
| ·全细胞催化剂催化脂肪酸甲酯反应 | 第72页 |
| ·全细胞催化剂催化己酸乙酯反应 | 第72-73页 |
| ·气相色谱分析 | 第73页 |
| ·NaOH 滴定分析 | 第73页 |
| ·实验结果与讨论 | 第73-75页 |
| ·毕赤酵母表面展示RML 催化脂肪酸甲酯的合成 | 第73-74页 |
| ·毕赤酵母表面展示CALB 催化己酸已酯的合成 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 结论与展望 | 第76-78页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 展望 | 第77页 |
| 本论文的创新点 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87页 |
