| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白及其进展 | 第11-13页 |
| ·毕赤酵母生物学特性 | 第11页 |
| ·毕赤酵母遗传学特征 | 第11页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优点 | 第11-12页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白 | 第12-13页 |
| ·毕赤酵母中的启动子的研究进展 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母中的启动子的简介 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母中碳源的研究进展 | 第14页 |
| ·脂肪酶的研究进展 | 第14-18页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第15-16页 |
| ·脂肪酶的理化性质 | 第16页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第16-17页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶B的研究进展 | 第17-18页 |
| ·本课题研究的意义及主要内容 | 第18-20页 |
| ·本课题研究的意义 | 第18-19页 |
| ·本课题研究的内容 | 第19-20页 |
| 第二章 利用PTEF1在毕赤酵母中表达CALB | 第20-50页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·实验材料与设备 | 第20-24页 |
| ·主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·溶液与培养基 | 第22-24页 |
| ·技术路线 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-38页 |
| ·菌体的培养 | 第24-25页 |
| ·菌种的保存 | 第25页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第25页 |
| ·毕赤酵母分泌表达载体构建 | 第25-33页 |
| ·重组质粒线性化 | 第33页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母重组子筛选 | 第34页 |
| ·各重组毕赤酵母的摇瓶分批补料发酵 | 第34页 |
| ·重组菌 GS115/pTEF9K-CALB 在 50L 发酵罐中流加补料发酵 | 第34页 |
| ·重组菌 GS115/pAOX9K-CALB 在 50L 发酵罐中流加补料发酵 | 第34-35页 |
| ·CALB酶活测定 | 第35页 |
| ·培养基中甘油浓度的测定 | 第35-36页 |
| ·蛋白质SDS电泳分析 | 第36-38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-48页 |
| ·CALB分泌表达载体的构建流程 | 第38-42页 |
| ·重组质粒转化及筛选 | 第42页 |
| ·甘油浓度对重组菌 GS115/pTEF9K-CALB 表达 CALB 的影响 | 第42-44页 |
| ·P_(TEF1)与P_(GAP)，P_(AOX1)在表达CALB上的比较 | 第44-45页 |
| ·重组菌GS115/pTEF9K-CALB在50L发酵罐中流加补料发酵 | 第45-48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 第三章 联合使用P_(TEF1)和P_(AOX1)在毕赤酵母中共表达CALB | 第50-58页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·实验材料与设备 | 第50-51页 |
| ·菌株与质粒 | 第50-51页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第51页 |
| ·化学试剂 | 第51页 |
| ·实验仪器设备 | 第51页 |
| ·溶液与培养基 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·CALB的PCR扩增 | 第51页 |
| ·DNA凝胶回收 | 第51页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第51-52页 |
| ·酶切产物回收 | 第52页 |
| ·DNA片段的连接反应 | 第52页 |
| ·大肠杆菌感转化 | 第52页 |
| ·大肠杆菌重组的提取 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pPICZαA-CALB的双酶切鉴定 | 第53页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及酵母转化 | 第53页 |
| ·重组毕赤酵母转化子的筛选及在毕赤酵母中的表达 | 第53页 |
| ·蛋白质电泳分析 | 第53页 |
| ·结果和讨论 | 第53-57页 |
| ·载体pPICZαA-CALB的构建 | 第53-54页 |
| ·毕赤酵母转化和重组子的筛选 | 第54-55页 |
| ·重组菌GAT与GA产酶比较 | 第55页 |
| ·重组菌GAT与GA的蛋白电泳分析 | 第55-56页 |
| ·重组菌GAT，GA 在50L发酵罐中流加补料发酵 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 结论与展望 | 第58-60页 |
| 结论 | 第58页 |
| 本论文的创新之处 | 第58-59页 |
| 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第67页 |
