| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-27页 |
| 1 流感病毒生物学特性概述 | 第11-15页 |
| 1.1 H9N2亚型流感病毒的流行病学和传播概况 | 第11-12页 |
| 1.2 H9N2亚型流感病毒引起感染动物的临床症状和大体病理变化 | 第12页 |
| 1.3 H9N2亚型流感病毒的抗原变异 | 第12-13页 |
| 1.4 H9N2亚型流感病毒的疫苗应用 | 第13页 |
| 1.5 H9N2亚型流感病毒的遗传特性和生物进化概况 | 第13-14页 |
| 1.6 H9N2亚型流感病毒在动物模型中的毒力,传播特性和分子机制 | 第14页 |
| 1.7 H9N2亚型流感病毒是新型流感病毒的基因供体 | 第14-15页 |
| 2 A型流感病毒血凝素(HA)中的N-连接糖基化位点概述 | 第15-19页 |
| 2.1 A型流感病毒HA蛋白的N-连接糖基化位点(NLG) | 第15页 |
| 2.2 A型流感病毒HA头部结合域上糖基化的差异性 | 第15-17页 |
| 2.3 HA糖基化影响了IAV对先天性免疫系统中凝集素的敏感性 | 第17-18页 |
| 2.4 HA糖基化模式对IAV生物学特性的影响 | 第18-19页 |
| 参考文献 | 第19-27页 |
| 第二部分 实验内容 | 第27-57页 |
| 第一章 H9N2亚型流感病毒HA蛋白糖基化位点突变的构建及病毒拯救 | 第27-47页 |
| 1 材料 | 第27-31页 |
| 1.1 病毒、细胞 | 第27页 |
| 1.2 SPF鸡胚、血清 | 第27页 |
| 1.3 基因、质粒 | 第27-28页 |
| 1.4 试剂 | 第28页 |
| 1.5 试剂配制 | 第28-30页 |
| 1.6 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-39页 |
| 2.1 病毒扩增 | 第31页 |
| 2.2 引物的设计与合成 | 第31-32页 |
| 2.3 病毒RNA提取和反转录 | 第32-33页 |
| 2.4 手提质粒 | 第33页 |
| 2.5 JM109感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.6 pHW204-HA/313G~+和pHW204-HA/218G~-313G~+转录/表达质粒的构建 | 第33-36页 |
| 2.7 pHW204-HA/313G~+和pHW204-HA/218G~-313G~+质粒的测序鉴定 | 第36页 |
| 2.8 病毒拯救 | 第36-37页 |
| 2.9 病毒HA蛋白的Western blot鉴定 | 第37-39页 |
| 3 结果 | 第39-45页 |
| 3.1 pHW204-HA/313G~+和pHW204-HA/218G~-313G~+转录/表达质粒的构建结果 | 第39-42页 |
| 3.2 pHW204-HA/313G~+和pHW204-HA/218G~-313G~+转录/表达质粒的测序结果 | 第42-43页 |
| 3.3 病毒拯救 | 第43-44页 |
| 3.4 F/98、rF/HA313G~+和rF/HA218G~-/313G~+病毒的Western-blot鉴定结果 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 4.1 8质粒系统拯救病毒方法的改进 | 第45页 |
| 4.2 313/218位糖基化位点的增加或缺失对HA蛋白迁移率的影响 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-47页 |
| 第二章 HA蛋白糖基化位点变化对病毒生物学特性的影响 | 第47-57页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| 1.1 病毒、细胞 | 第47页 |
| 1.2 SPF鸡胚、实验动物 | 第47页 |
| 1.3 试剂 | 第47页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第47页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第47-48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| 2.1 病毒纯化扩增 | 第48页 |
| 2.2 病毒鸡胚半数感染量(EID_(50))和鸡胚半数致死量(ELD_(50))测定 | 第48页 |
| 2.3 病毒细胞半数感染量(TCID_(50))的测定 | 第48页 |
| 2.4 鸡的致病性实验 | 第48-49页 |
| 2.5 病毒的传播途径特性实验 | 第49页 |
| 2.6 病毒的交叉免疫保护特性实验 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-54页 |
| 3.1 F/98、rF/HA313G~+和rF/HA218G~-/313G~+病毒的EID_(50)和ELD_(50)检测结果 | 第50-51页 |
| 3.2 F/98、rF/HA313G~+和rF/HA218G~-/313G~+病毒的TCID_(50)检测结果 | 第51页 |
| 3.3 F/98、rF/HA313G~+和rF/HA218G~-/313G~+病毒在鸡气管和肺中的复制滴度 | 第51-52页 |
| 3.4 F/98、rF/HA313G~+和rF/HA218G~-/313G~+病毒的传播特性实验结果 | 第52-53页 |
| 3.5 F/98、rF/HA313G~+和rF/HA218G~-/313G~+病毒的交叉免疫保护性实验结果 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.1 313/218位糖基化位点变化对病毒感染力、复制滴度及传播特性的影响 | 第54-55页 |
| 4.2 糖基化位点变化对病毒抗原性的影响 | 第55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 全文小结 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
