| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 绪论 | 第12-31页 |
| 1.1 DNA聚合酶 | 第12-24页 |
| 1.1.1 真核生物DNA聚合酶 δ 简介 | 第12-14页 |
| 1.1.2 真核生物DNA聚合酶 δ 的亚基组成 | 第14-15页 |
| 1.1.3 不同亚基组成Pol δ 蛋白复合物的体外重组 | 第15-18页 |
| 1.1.4 不同亚基组成的Pol δ 复合体的酶学特性 | 第18-20页 |
| 1.1.5 体内形成缺失了p12的三聚体Pol δ3-?12的多种途径 | 第20-24页 |
| 1.2 泛素简介 | 第24-29页 |
| 1.2.1 泛素蛋白的结构 | 第24-25页 |
| 1.2.2 泛素化修饰过程 | 第25-27页 |
| 1.2.3 泛素化修饰对细胞周期检查点和DNA损伤修复的调控 | 第27-29页 |
| 1.3 立题依据 | 第29-30页 |
| 1.4 研究内容与研究意义 | 第30-31页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第30页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第30-31页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第31-55页 |
| 第一章 实验材料和主要仪器设备 | 第31-34页 |
| 1.1 菌种和载体 | 第31页 |
| 1.2 细胞培养相关试剂 | 第31页 |
| 1.3 工具酶及检测试剂盒 | 第31-32页 |
| 1.4 其他试剂及材料 | 第32页 |
| 1.5 蛋白及抗体 | 第32页 |
| 1.6 主要仪器设备 | 第32-34页 |
| 第二章 试剂的配制 | 第34-40页 |
| 2.1 分子克隆相关试剂 | 第34-35页 |
| 2.2 Western-Blot相关试剂 | 第35-37页 |
| 2.3 蛋白表达纯化相关试剂 | 第37-40页 |
| 第三章 实验方法 | 第40-55页 |
| 3.1 PCR反应 | 第40页 |
| 3.2 PCR产物纯化 | 第40-41页 |
| 3.3 双酶切反应 | 第41页 |
| 3.4 胶回收 | 第41-42页 |
| 3.5 连接反应 | 第42页 |
| 3.6 感受态细胞制备 | 第42-43页 |
| 3.7 连接产物的转化 | 第43页 |
| 3.8 小规模质粒提取 | 第43-44页 |
| 3.9 双酶切验证 | 第44页 |
| 3.10 昆虫Sf-9 细胞的培养复苏 | 第44-45页 |
| 3.11 Tn7转座子上的转座 | 第45-46页 |
| 3.12 Bacmid DNA提取 | 第46-47页 |
| 3.13发生重组RNF8杆状病毒Bacmid DNA的PCR验证 | 第47-48页 |
| 3.14 RNF8病毒的制备与扩增 | 第48-49页 |
| 3.15 p50病毒的活化与扩增 | 第49页 |
| 3.16 SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第49-50页 |
| 3.17 Western-Blot免疫印迹反应 | 第50页 |
| 3.18 RNF8和p50重组病毒的检验 | 第50-51页 |
| 3.19 His-RNF8融合蛋白的表达与纯化 | 第51-52页 |
| 3.20 蛋白浓度测定 | 第52-53页 |
| 3.21 RNF8蛋白质谱鉴定 | 第53页 |
| 3.22 His-p50融合蛋白的表达与纯化 | 第53页 |
| 3.23 体外泛素化反应系统 | 第53-55页 |
| 第三部分 结果与讨论 | 第55-76页 |
| 第一章 重组蛋白的制备 | 第55-68页 |
| 1.1 RNF8融合蛋白的制备 | 第55-64页 |
| 1.1.1 重组供体质粒pFastBacHTb-RNF8的构建 | 第55-56页 |
| 1.1.2 重组杆状病毒Bacmid DN A的制备 | 第56-57页 |
| 1.1.3 RNF8重组病毒的制备 | 第57-58页 |
| 1.1.4 His-RNF8蛋白的表达与纯化 | 第58-62页 |
| 1.1.5 RNF8蛋白鉴定 | 第62-64页 |
| 1.2 p50融和蛋白的制备 | 第64-68页 |
| 1.2.1 p50重组病毒的检验 | 第64页 |
| 1.2.2 p50融合蛋白的表达与纯化 | 第64-68页 |
| 第二章 RNF8介导Pol δ 亚基的体外泛素化分析 | 第68-73页 |
| 2.1 RNF8介导p50亚基的体外泛素化分析 | 第68-70页 |
| 2.2 RNF8介导p12亚基的体外泛素化分析 | 第70-71页 |
| 2.3 RNF8介导p125亚基的体外泛素化分析 | 第71-73页 |
| 第三章 RAD6/RAD18系统介导Pol δ p50和p12亚基的体外泛素分析 | 第73-76页 |
| 3.1 以p50为基质的泛素化反应 | 第73-74页 |
| 3.2 以p12为基质的泛素化修饰反应 | 第74-76页 |
| 总结与展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 在读期间参加课题和发表论文情况 | 第87页 |
