| 摘要 | 第5-7页 |
| SUMMARY | 第7-8页 |
| 英文缩略 | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 猪 Β4GALNT2与异种器官移植 | 第12-15页 |
| 1.1 异种器官移植 | 第12-13页 |
| 1.2 猪 β4GalNT2基因 | 第13-15页 |
| 2 ZBED6与肌肉生长 | 第15-18页 |
| 2.1 ZBED6的发现 | 第15-17页 |
| 2.2 ZBED6的研究进展 | 第17-18页 |
| 3 CRISPR/CAS9的发现及发展 | 第18-19页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二部分 CRISPR/CAS9介导的 Β4GALNT2基因敲除猪制备 | 第21-38页 |
| 1 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1 动物性材料 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂及实验耗材 | 第21-22页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第22页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.1 CRISPR/Cas9靶向载体的设计及构建 | 第24-26页 |
| 2.2 sgRNA表达载体基因突变效率检测 | 第26-27页 |
| 2.2.1 细胞的转染 | 第26页 |
| 2.2.2 PCR、TA克隆及测序 | 第26-27页 |
| 2.3 单细胞克隆的获得及鉴定 | 第27页 |
| 2.4 β4GalNT2基因敲除猪的制备及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.5 PBMC与FITC-DBA共孵育 | 第28页 |
| 2.6 脱靶分析 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-36页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9靶向载体的构建及基因突变效率 | 第29-30页 |
| 3.2 单细胞克隆鉴定 | 第30-32页 |
| 3.3 β4GalNT2基因敲除猪的制备及鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 PBMC与FITC-DBA共孵育 | 第33-35页 |
| 3.5 脱靶分析 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三部分 CRISPR/CAS9介导的ZBED6基因敲除猪制备 | 第38-53页 |
| 1 实验材料 | 第38-41页 |
| 1.1 动物性材料 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂及实验耗材 | 第38-39页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第39页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第39-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-44页 |
| 2.1 CRISPR/Cas9靶向载体的设计及构建 | 第41页 |
| 2.2 sgRNA表达载体基因突变效率检测 | 第41-42页 |
| 2.3 单细胞克隆的获得及鉴定 | 第42页 |
| 2.4 ZBED6基因敲除猪的制备及鉴定 | 第42-43页 |
| 2.5 脱靶分析 | 第43-44页 |
| 2.6 ZBED6基因敲除猪与野生型猪的比较 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-51页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9靶向载体的构建及基因突变效率 | 第44-45页 |
| 3.2 单细胞克隆鉴定 | 第45页 |
| 3.3 ZBED6基因敲除猪的制备及鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4 脱靶分析 | 第46-47页 |
| 3.5 ZBED6基因敲除猪与野生型猪的比较 | 第47-51页 |
| 3.5.1 外观与体重比较 | 第47-48页 |
| 3.5.2 生理指标检测 | 第48-49页 |
| 3.5.3 胰岛素和IGF2检测 | 第49-50页 |
| 3.5.4 凝血四项检测 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四部分 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 导师简介 | 第62-64页 |
