| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要英文缩略词对照表 | 第6-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-24页 |
| 1.1 结构生物学发展及现状 | 第10-16页 |
| 1.1.1 结构生物学的发展 | 第10页 |
| 1.1.2 冷冻电镜技术飞速发展 | 第10-16页 |
| 1.2 电子显微学是结构生物学的重要方法 | 第16-17页 |
| 1.3 电子显微镜成像原理 | 第17-18页 |
| 1.3.1 电子与样品之间的相互作用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 电子成像系统的影响与衬度传递函数 | 第18页 |
| 1.4 电子显微镜三维重构 | 第18-22页 |
| 1.4.1 三维重构原理—中心截面定理 | 第18-20页 |
| 1.4.2 三维重构技术 | 第20-21页 |
| 1.4.3 三维结构的评估 | 第21-22页 |
| 1.5 研究意义 | 第22-23页 |
| 1.6 论文结构 | 第23-24页 |
| 第2章 材料与方法 | 第24-39页 |
| 2.1 实验仪器 | 第24页 |
| 2.2 电子显微镜样品制备 | 第24-28页 |
| 2.2.1 载网和载网的亲水化处理 | 第24-26页 |
| 2.2.2 负染样品制备方法 | 第26页 |
| 2.2.3 冷冻样品制备方法 | 第26-28页 |
| 2.3 Autoloader上样过程 | 第28-29页 |
| 2.4 冷冻样品质量的判断 | 第29-30页 |
| 2.5 电子显微镜的调节过程 | 第30-33页 |
| 2.6 半自动化数据收集 | 第33-34页 |
| 2.7 数据处理 | 第34-39页 |
| 第3章 γ-secretase蛋白复合体的结构研究 | 第39-69页 |
| 3.1 γ-secretase蛋白复合体简介 | 第39-40页 |
| 3.2 γ-secretase与阿尔兹海默症 | 第40-41页 |
| 3.3 γ-secretase研究现状及意义 | 第41-43页 |
| 3.4 单颗粒技术研究T4-γ-secretase结构 | 第43-60页 |
| 3.4.1 T4-γ-secretase质粒构建 | 第43-44页 |
| 3.4.2 蛋白提纯 | 第44-45页 |
| 3.4.3 蛋白活性检测 | 第45页 |
| 3.4.4 γ-secretase负染电镜结果 | 第45-46页 |
| 3.4.5 冷冻制样及初始模型构建 | 第46-47页 |
| 3.4.6 大规模数据收集 | 第47-49页 |
| 3.4.7 数据处理 | 第49-53页 |
| 3.4.8 三维重构过程中的新尝试 | 第53-60页 |
| 3.5 数据分析 | 第60-61页 |
| 3.6 γ-secretase结构分析 | 第61-67页 |
| 3.6.1 γ-secretase的组装 | 第61-64页 |
| 3.6.2 PS1的结构 | 第64-65页 |
| 3.6.3 Aph-1结构 | 第65-66页 |
| 3.6.4 去垢剂对于γ-secretase结构的影响 | 第66-67页 |
| 3.7 本章小结 | 第67-69页 |
| 第4章 Rad51与DNA形成螺旋复合物重构 | 第69-104页 |
| 4.1 Rad51蛋白简介 | 第69-72页 |
| 4.2 螺旋体重构简介 | 第72-76页 |
| 4.2.1 螺旋体介绍 | 第72-73页 |
| 4.2.2 螺旋体重构方法 | 第73-74页 |
| 4.2.3 螺旋体重构相关软件介绍 | 第74-76页 |
| 4.3 蛋白纯化及样品制备 | 第76-78页 |
| 4.3.1 人源Rad51及鼠源Hop2-Mnd1蛋白纯化 | 第76页 |
| 4.3.2 Pre-synaptic复合物组装 | 第76-77页 |
| 4.3.3 Post-synaptic复合物组装 | 第77页 |
| 4.3.4 Synaptic复合物组装 | 第77-78页 |
| 4.4 负染及冷冻电镜结果 | 第78-79页 |
| 4.5 冷冻电镜三维重构 | 第79-88页 |
| 4.5.1 在SPIDER中实现IHRSR算法 | 第79-84页 |
| 4.5.2 RELION1.2进行螺旋重构 | 第84-88页 |
| 4.6 模型搭建 | 第88-91页 |
| 4.7 利用FREALIGN进行中间态结构解析 | 第91-93页 |
| 4.8 结构分析 | 第93-103页 |
| 4.8.1 Pre-synaptic和post-synaptic复合物的高分辨电镜结构 | 第93-94页 |
| 4.8.2 Rad51单体之间的相互作用 | 第94-97页 |
| 4.8.3 Rad51在pre-synaptic和post-synaptic复合物中与DNA的相互作用 | 第97-100页 |
| 4.8.4 Synaptic过程中一种可能的中间态 | 第100-103页 |
| 4.9 本章小结 | 第103-104页 |
| 第5章 总结与展望 | 第104-109页 |
| 5.1 本文总结 | 第104-107页 |
| 5.2 对冷冻电子显微学的展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第119页 |
