中文摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
符号说明 | 第10-11页 |
文献综述 | 第11-30页 |
综述一 沙门氏菌PEG菌毛研究进展 | 第11-15页 |
1 PEG菌毛基因进化和推进蛋白分类 | 第11-12页 |
2 PEG菌毛的分子生物学特征 | 第12-13页 |
3 PEG菌毛的表达 | 第13-14页 |
4 PEG菌毛在致病性中发挥的作用 | 第14页 |
5 未来研究方向 | 第14页 |
6 展望 | 第14-15页 |
综述二 沙门氏菌检测方法研究进展 | 第15-23页 |
1 传统检测方法 | 第15-16页 |
2 免疫学检测技术 | 第16-18页 |
3 分子生物学技术 | 第18-20页 |
4 沙门氏菌其它检测方法 | 第20-21页 |
5 单克隆抗体在沙门氏菌检测中的应用 | 第21-22页 |
6 小结 | 第22-23页 |
参考文献 | 第23-30页 |
第一章 沙门氏菌菌毛主要亚单位基因pegA的原核表达 | 第30-43页 |
1 材料 | 第31-32页 |
1.1 菌株及载体 | 第31页 |
1.2 培养基和主要试剂 | 第31页 |
1.3 主要仪器设备 | 第31-32页 |
2 方法 | 第32-37页 |
2.1 pegA基因目的片段的扩增 | 第32页 |
2.2 pMD19-T-pegA重组质粒的构建 | 第32-34页 |
2.3 pET-22b (+)-pegA重组质粒的构建 | 第34-35页 |
2.4 pegA基因的表达及SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
2.5 大量诱导表达重组蛋白及鉴定 | 第36-37页 |
2.6 Western blot检测纯化蛋白 | 第37页 |
3、结果 | 第37-40页 |
3.1 PCR扩增pegA基因 | 第37页 |
3.2 重组质粒pMD19-T-pegA酶切鉴定 | 第37-38页 |
3.3 重组质粒pET-22b(+)-pegA菌落PCR鉴定 | 第38页 |
3.4 重组质粒pMD19-T-pegA和pET-22b(+)-pegA的测序鉴定结果 | 第38-39页 |
3.5 融合蛋白诱导表达及分析 | 第39-40页 |
3.6 PegA蛋白量测定 | 第40页 |
3.7 Western blot鉴定结果 | 第40页 |
4、讨论 | 第40-42页 |
参考文献 | 第42-43页 |
第二章 抗沙门氏菌PEG菌毛单克隆抗体的制备 | 第43-56页 |
1 材料 | 第44-45页 |
2、方法 | 第45-50页 |
2.1 抗原的制备 | 第45页 |
2.2 抗原乳化 | 第45页 |
2.3 动物免疫 | 第45页 |
2.4 骨髓瘤细胞SP2/O制备 | 第45页 |
2.5 饲养细胞的制备 | 第45-46页 |
2.6 脾淋巴细胞的制备 | 第46页 |
2.7 细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养 | 第46-47页 |
2.8 杂交瘤细胞株筛选 | 第47-48页 |
2.9 杂交瘤细胞的复苏 | 第48页 |
2.10 腹水的制备及效价检测 | 第48-49页 |
2.11 单抗亚类鉴定 | 第49页 |
2.12 单克隆抗体特异性检测 | 第49-50页 |
3、结果 | 第50-53页 |
3.1 免疫小鼠血清效价检测结果 | 第50-51页 |
3.2 间接ELISA最佳条件确定 | 第51页 |
3.3 细胞融合 | 第51页 |
3.4 腹水纯化及浓度测定 | 第51-52页 |
3.5 腹水抗体效价 | 第52页 |
3.6 抗体的亚类鉴定 | 第52-53页 |
3.7 单克隆抗体稳定性 | 第53页 |
3.8 单克隆抗体特异性检测 | 第53页 |
4、讨论 | 第53-55页 |
参考文献 | 第55-56页 |
第三章 抗沙门氏菌PEG菌毛单克隆抗体的初步临床应用 | 第56-61页 |
1、材料 | 第57页 |
1.1 菌株和抗体 | 第57页 |
1.2 主要试剂 | 第57页 |
1.3 主要仪器设备 | 第57页 |
2、方法 | 第57-58页 |
2.1 冻存菌复苏培养 | 第57页 |
2.2 PegA单抗介导的玻板凝集方法的临床应用 | 第57-58页 |
2.3 沙门氏菌诊断血清平行对照 | 第58页 |
3、结果 | 第58-59页 |
4、讨论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-61页 |
全文总结 | 第61-62页 |
致谢 | 第62-63页 |