| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 立题背景和意义 | 第9页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第9-14页 |
| 1.2.1 酯酶/脂肪酶简介 | 第9页 |
| 1.2.2 嗜热酯酶/脂肪酶的来源 | 第9-10页 |
| 1.2.3 嗜热酯酶/脂肪酶的特征 | 第10-11页 |
| 1.2.4 嗜热酯酶/脂肪酶的筛选方法 | 第11-12页 |
| 1.2.5 Aquifex aeolicus菌株 | 第12-13页 |
| 1.2.6 表达系统 | 第13-14页 |
| 1.3 论文研究思路和内容 | 第14-15页 |
| 1.3.1 研究思路 | 第14页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第14页 |
| 1.3.3 课题来源 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 基因、菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第15-16页 |
| 2.1.3 培养基和溶液 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 Aaeo1和Aaeo2氨基酸序列和结构的分析 | 第17-18页 |
| 2.2.2 Aaeo1和Aaeo2基因重组表达载体的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.3 重组菌株的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.4 重组酶Aaeo1和Aaeo2催化位点突变菌株的构建 | 第20-21页 |
| 2.2.5 重组菌株的摇瓶发酵 | 第21页 |
| 2.2.6 重组酶酶活测定方法 | 第21页 |
| 2.2.7 蛋白浓度测定方法 | 第21页 |
| 2.2.8 SDS-PAGE分析 | 第21-22页 |
| 2.2.9 重组酶的分离纯化研究 | 第22页 |
| 2.2.10 重组酶酶学性质 | 第22-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-41页 |
| 3.1 嗜热脂解酶Aaeo1和Aaeo2氨基酸序列和结构分析 | 第25-28页 |
| 3.1.1 氨基酸序列分析 | 第25-26页 |
| 3.1.2 结构分析 | 第26-27页 |
| 3.1.3 进化树构建 | 第27-28页 |
| 3.2 重组酶Aaeo1和Aaeo2在毕赤酵母中的异源表达和纯化 | 第28-30页 |
| 3.2.1 毕赤酵母重组表达菌株的构建 | 第28页 |
| 3.2.2 毕赤酵母重组菌的摇瓶发酵 | 第28-29页 |
| 3.2.3 重组酶的分离纯化 | 第29-30页 |
| 3.3 脂解酶Aaeo1和Aaeo2的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3.1 毕赤酵母突变重组菌的构建与表达 | 第30页 |
| 3.3.2 突变重组酶的分离纯化 | 第30-31页 |
| 3.4 重组酶Aaeo1和Aaeo2的酶学性质研究 | 第31-37页 |
| 3.4.1 重组酶的底物特异性 | 第31-32页 |
| 3.4.2 温度对重组酶活性及稳定性的影响 | 第32页 |
| 3.4.3 重组酶Tm值测定 | 第32-34页 |
| 3.4.4 pH对重组酶活性及稳定性的影响 | 第34页 |
| 3.4.5 金属离子对重组酶稳定性的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.6 有机溶剂对重组酶稳定性的影响 | 第35页 |
| 3.4.7 表面活性剂对重组酶稳定性的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.8 抑制剂对重组酶稳定性的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.9 重组酶动力学参数测定 | 第37页 |
| 3.5 Aaeo1和Aaeo2在大肠杆菌中的异源表达和分离纯化 | 第37-39页 |
| 3.5.1 大肠杆菌重组菌的构建和摇瓶发酵 | 第37-38页 |
| 3.5.2 融合重组酶的分离纯化 | 第38-39页 |
| 3.6 重组酶在毕赤酵母和大肠杆菌系统中表达效果的比较 | 第39-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-43页 |
| 主要结论 | 第41-42页 |
| 展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
