| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 高温胁迫 | 第13-17页 |
| 1.1.1 高温胁迫的研究进展 | 第13页 |
| 1.1.2 高温胁迫对植物的伤害 | 第13页 |
| 1.1.3 高温胁迫下植物的耐热机制 | 第13-17页 |
| 1.1.3.1 高温胁迫下细胞结构的改变 | 第14页 |
| 1.1.3.2 高温胁迫使植物发生氧化应激反应 | 第14页 |
| 1.1.3.3 高温胁迫与植物体内泛素化修饰的关系 | 第14-15页 |
| 1.1.3.4 高温胁迫与渗透调节物质 | 第15页 |
| 1.1.3.5 高温胁迫对细胞膜稳定性的影响 | 第15页 |
| 1.1.3.6 高温胁迫对植物体内蛋白质合成的影响 | 第15-17页 |
| 1.2 表观遗传学 | 第17-18页 |
| 1.2.1 表观遗传学研究内容 | 第17页 |
| 1.2.2 表观遗传学主要研究方法 | 第17-18页 |
| 1.3 DNA甲基化 | 第18-22页 |
| 1.3.1 植物DNA甲基化 | 第19-20页 |
| 1.3.2 植物DNA甲基转移酶 | 第20-21页 |
| 1.3.3 DNA甲基化调控基因表达的机制 | 第21-22页 |
| 1.3.4 DNA甲基化的生物学功能 | 第22页 |
| 1.4 RNA介导的DNA甲基化 | 第22-23页 |
| 1.5 表观遗传学与非生物胁迫的关系 | 第23-25页 |
| 1.6 正向遗传学与反向遗传学 | 第25页 |
| 1.6.1 正向遗传学 | 第25页 |
| 1.6.2 反向遗传学 | 第25页 |
| 1.7 图位克隆技术简介 | 第25-26页 |
| 1.7.1 图位克隆技术简介 | 第25-26页 |
| 1.7.2 图位克隆技术操作步骤 | 第26页 |
| 1.8 本研究的目的及其意义 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-46页 |
| 2.1 材料 | 第28-32页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第28页 |
| 2.1.3 植物材料培养与处理 | 第28页 |
| 2.1.4 酶与各种生化试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.5 实验引物 | 第29-31页 |
| 2.1.6 网络信息资源 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-46页 |
| 2.2.1 植物基因组的提取 | 第32页 |
| 2.2.2 亚硫酸氢盐处理基因组及测序 | 第32-34页 |
| 2.2.2.1 亚硫酸氢盐处理基因组 | 第32-33页 |
| 2.2.2.2 亚硫氢酸盐测序PCR（Bisulfite Sequencing PCR, BSP） | 第33-34页 |
| 2.2.3 载体构建 | 第34-35页 |
| 2.2.3.1 凝胶电泳中DNA片段的回收 | 第34页 |
| 2.2.3.2 连接反应 | 第34页 |
| 2.2.3.3 酶切反应 | 第34-35页 |
| 2.2.3.4 启动子驱动GUS/LUC报告基因表达载体的构建 | 第35页 |
| 2.2.3.5 超表达XCT（AT2G21150）载体的构建 | 第35页 |
| 2.2.3.6 RNAi干涉表达载体的构建 | 第35页 |
| 2.2.4 大肠杆菌Top10感受态的制备和转化 | 第35-37页 |
| 2.2.4.1 大肠杆菌Top10感受态的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.4.2 大肠杆菌的转化 | 第36页 |
| 2.2.4.3 试剂盒法提取大肠杆菌质粒 | 第36-37页 |
| 2.2.5 农杆菌感受态的制备和转化 | 第37页 |
| 2.2.5.1 根癌农杆菌GV3101感受态的制备 | 第37页 |
| 2.2.5.2 冻融法转化农杆菌细胞 | 第37页 |
| 2.2.6 植物材料的遗传转化及鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.6.1 拟南芥的遗传转化 | 第37-38页 |
| 2.2.6.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第38页 |
| 2.2.6.3 T-DNA插入突变体纯合体的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.2.7 本生烟瞬时转化及检测 | 第39-40页 |
| 2.2.7.1 本生烟瞬时转化 | 第39页 |
| 2.2.7.2 瞬时转化本生烟的GUS活性测定 | 第39-40页 |
| 2.2.7.3 瞬时转化本生烟的LUC活性测定 | 第40页 |
| 2.2.8 RNA的提取、纯化、反转录及RT-PCR检测 | 第40-45页 |
| 2.2.8.1 Trizol法提取总RNA | 第40-41页 |
| 2.2.8.2 RNA中基因组DNA的去除 | 第41页 |
| 2.2.8.3 RNA反转录 | 第41页 |
| 2.2.8.4 半定量RT-PCR（Semiquantitative RT-PCR） | 第41页 |
| 2.2.8.5 实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR, qRT-PCR） | 第41-42页 |
| 2.2.8.6 miRcute miRNA Isolation Kit提取sRNA | 第42-43页 |
| 2.2.8.7 miRcute miRNA cDNA第一链合成 | 第43-44页 |
| 2.2.8.8 miRcute miRNA荧光定量PCR | 第44-45页 |
| 2.2.9 热处理方法 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-60页 |
| 3.1 XCT在植物热胁迫响应中的功能分析 | 第46-54页 |
| 3.1.1 表观遗传调控的温度胁迫诱导基因的筛选 | 第46-47页 |
| 3.1.2 XCT突变体及超表达植株的表型及功能鉴定 | 第47-50页 |
| 3.1.2.1 XCT突变体及超表达植株的获得 | 第47页 |
| 3.1.2.2 高温胁迫下XCT突变体及超表达植株的表达量鉴定 | 第47-48页 |
| 3.1.2.3 高温胁迫下XCT突变体及超表达植株的表型鉴定 | 第48-50页 |
| 3.1.3 XCT表达模式分析 | 第50页 |
| 3.1.3.1 XCT组织表达模式分析 | 第50页 |
| 3.1.3.2 XCT诱导表达模式分析 | 第50页 |
| 3.1.4 靶向XCT启动子的 24-nt siRNA分析 | 第50-52页 |
| 3.1.4.1 XCT启动子调控区域的 24-nt siRNA分析 | 第50-51页 |
| 3.1.4.2 高温胁迫下 24-nt si RNA积累量检测 | 第51-52页 |
| 3.1.5 24-nt si RNA介导XCT启动子DNA甲基化的验证 | 第52-54页 |
| 3.1.5.1 瞬时表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.1.5.2 烟草瞬时转化后GUS和LUC报告基因活性检测 | 第53-54页 |
| 3.2 耐高温突变体的筛选及表型分析 | 第54-60页 |
| 3.2.1 抗热突变体筛选条件的确定 | 第54页 |
| 3.2.2 抗热突变体的筛选 | 第54-55页 |
| 3.2.3 h46萌发期表型分析 | 第55-56页 |
| 3.2.4 h46幼苗期表型分析 | 第56页 |
| 3.2.5 h46成苗期表型分析 | 第56-58页 |
| 3.2.5.1 h46短日照条件下的表型分析 | 第56-57页 |
| 3.2.5.2 h46长日照条件下的表型分析 | 第57-58页 |
| 3.2.5.3 h46长日照条件下早花表型 | 第58页 |
| 3.2.6 突变基因的图位克隆 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
