| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| ·含硝基苯废水的生物治理 | 第10页 |
| ·含硝基苯废水的生物降解途径 | 第10-12页 |
| ·硝基苯微生物降解的氧化途径 | 第11页 |
| ·硝基苯微生物降解的还原途径 | 第11-12页 |
| ·硝基还原酶的研究现状 | 第12-16页 |
| ·硝基还原酶性质特点及分类 | 第13-14页 |
| ·硝基还原酶的生物学功能 | 第14-16页 |
| ·未知序列基因的克隆策略 | 第16-19页 |
| ·简并PCR | 第17页 |
| ·热不对称交错PCR(TAIL-PCR) | 第17-19页 |
| ·本研究的目的和策略 | 第19-21页 |
| ·研究目的 | 第19-20页 |
| ·研究策略 | 第20-21页 |
| 第2章 硝基苯硝基还原酶基因的克隆与重组质粒构建 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·试剂盒和工具酶 | 第21页 |
| ·其他试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·Pandoraea sp.BD-33硝基苯硝基还原酶基因的克隆与测序 | 第23-26页 |
| ·构建重组质粒 | 第26-28页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·Pandoraea sp.BD-33硝基苯硝基还原酶基因部分序列的扩增 | 第29-30页 |
| ·TAIL-PCR扩增硝基苯硝基还原酶侧翼序列 | 第30-31页 |
| ·硝基苯硝基还原酶基因全序列扩增 | 第31-33页 |
| ·重组质粒pET-28a-NB的构建 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第3章 硝基苯硝基还原酶基因的表达、纯化和酶性质的研究 | 第35-47页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌种和质粒 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第36-37页 |
| ·主要仪器和设备 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·硝基苯硝基还原酶的诱导表达 | 第37页 |
| ·亲和层析纯化重组硝基苯硝基还原酶 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第38-39页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第39页 |
| ·重组硝基苯硝基还原酶性质的研究 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·硝基苯硝基还原酶的纯化结果 | 第40-41页 |
| ·重组酶的最适反应温度和热稳定性 | 第41-43页 |
| ·重组酶的最适反应pH及pH稳定性 | 第43-45页 |
| ·酶促反应动力学研究 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第4章 结论和展望 | 第47-49页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| ·后续研究展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
