| 致谢 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 目次 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| ·MicroRNA研究进展 | 第13-19页 |
| ·简介 | 第13页 |
| ·MicroRNA的生物发生及沉默机制 | 第13-15页 |
| ·靶基因鉴定 | 第15-17页 |
| ·MicroRNA表达模式 | 第17-18页 |
| ·MicroRNA在动物生长中的调控作用 | 第18-19页 |
| ·家蚕microRNA研究进展 | 第19页 |
| ·真核生物选择性剪接与互斥剪接研究进展 | 第19-25页 |
| ·选择性剪接 | 第19-20页 |
| ·选择性剪接的起源和进化 | 第20页 |
| ·选择性剪接的类型 | 第20-21页 |
| ·互斥性剪接 | 第21-24页 |
| ·14-3-3基因的研究进展 | 第24-25页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第25-28页 |
| ·研究目的及意义 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| ·microRNA对家蚕丝蛋白轻链的调控研究 | 第26页 |
| ·家蚕14-3-3ζ基因互斥外显子选择机制研究 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| 第三章 MicroRNA对家蚕丝蛋白轻链基因的表达调控研究 | 第28-51页 |
| ·材料与试剂 | 第28-31页 |
| ·实验方法 | 第31-43页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·预测microRNA与家蚕丝蛋白轻链基因的互作 | 第33页 |
| ·家蚕后部丝腺RNA的提取 | 第33页 |
| ·Invitrogen SuperScriptⅢ 1st Strand cDNA synthesis Kit进行逆转录 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的割胶回收(东盛公司的凝胶回收试剂盒) | 第35页 |
| ·PCR产物的T载体连接反应 | 第35页 |
| ·E.coli TG1感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第36页 |
| ·阳性菌落扩大培养及质粒提取 | 第36页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒插入片段序列测序 | 第36页 |
| ·Psk载体的制备 | 第36页 |
| ·报告基因表达载体及microRNA表达载体共转染家蚕BmN细胞 | 第36-37页 |
| ·利用荧光显微镜检测家蚕细胞EGFP发光强度 | 第37页 |
| ·家蚕不同组织的small RNA提取 | 第37页 |
| ·Small RNA加poly(A)尾巴 | 第37页 |
| ·家蚕丝蛋白轻链基因的原核表达 | 第37-39页 |
| ·重组fibroin L Chain-6His蛋白纯化回收 | 第39页 |
| ·融合蛋白透析除尿素复性 | 第39页 |
| ·融合蛋白浓度测定(考马斯亮兰法Bradford) | 第39-40页 |
| ·融合蛋白免疫新西兰雄兔 | 第40-41页 |
| ·抗体的效价测定(ELISA) | 第41-42页 |
| ·Western印迹检测表达的蛋白 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-49页 |
| ·通过软件预测microRNA与家蚕丝蛋白轻链基因的互作 | 第43-44页 |
| ·家蚕丝蛋白轻链3'UTR的克隆 | 第44页 |
| ·报告基因表达载体及microRNA表达载体共转染家蚕BmN细胞荧光分析 | 第44-46页 |
| ·microRNA在家蚕各组织中的表达分析 | 第46-47页 |
| ·家蚕丝素轻链蛋白的原核表达 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白浓度测定 | 第48-49页 |
| ·Elisa检测抗原血清效价 | 第49页 |
| ·western印迹检测抗体血清 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 家蚕14-3-3ξ基因互斥外显子选择机制研究 | 第51-63页 |
| ·材料与试剂 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·家蚕及其他鳞翅目物种14-3-3ζ基因比较分析 | 第51页 |
| ·家蚕等物种14-3-3ζ基因其互斥外显子间序列的二级结构预测 | 第51页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·Genome DNA提取 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR,酶切检测各突变表达载体转染后其互斥外显子5a,5b含量 | 第53页 |
| ·结果分析 | 第53-60页 |
| ·家蚕及其他鳞翅目物种14-3-3ζ基因互斥外显子分析 | 第53-55页 |
| ·以家蚕为研究对象,研究内含子间二级结构对互斥选择的调控影响 | 第55-59页 |
| ·家蚕各组织及发育阶段14-3-3ζ基因表达分析 | 第59-60页 |
| ·讨论分析 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
