| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 主要符号说明 | 第9-14页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 PPAR基因家族的结构与功能 | 第14-17页 |
| 1.1.1 PPAR基因家族组成及结构 | 第14-16页 |
| 1.1.2 PPARs主要功能 | 第16-17页 |
| 1.1.2.1 PPARs与糖脂代谢 | 第16页 |
| 1.1.2.2 PPARs与脂肪细胞 | 第16-17页 |
| 1.1.2.3 PPARs与成肌细胞 | 第17页 |
| 1.1.2.4 PPARs与免疫 | 第17页 |
| 1.2 PPAR基因家族成员间功能分歧及研究 | 第17-20页 |
| 1.2.1 PPARs基因在脂肪细胞分化及脂质代谢中的差异 | 第17-18页 |
| 1.2.2 PPARs基因在胚胎发育过程中的差异 | 第18-19页 |
| 1.2.3 PPAR基因家族分子进化 | 第19-20页 |
| 1.3 PPARs与家禽重要经济性状形成 | 第20-22页 |
| 1.3.1 PPARs与禽类体脂沉积 | 第20-21页 |
| 1.3.2 PPARs与禽类肉质 | 第21页 |
| 1.3.3 PPARs与肥肝 | 第21-22页 |
| 1.4 PPARs的转录调控研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4.1 启动子及活性调控区域 | 第22页 |
| 1.4.2 PPARs的转录调控研究 | 第22-24页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂盒及耗材 | 第25页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第26页 |
| 2.1.5 相关分析软件 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-39页 |
| 2.2.1 PPAR基因家族分子进化分析 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 蛋白质结构域 | 第27页 |
| 2.2.1.2 进化树构建 | 第27页 |
| 2.2.1.3 氨基酸选择压力 | 第27页 |
| 2.2.1.4 转录因子 | 第27-28页 |
| 2.2.2 鸭基因组DNA的提取和检测 | 第28页 |
| 2.2.2.1 鸭肌肉组织中的DNA提取 | 第28页 |
| 2.2.2.2 检测所提取的DNA质量 | 第28页 |
| 2.2.3 鸭PPARs基因启动子区扩增 | 第28-30页 |
| 2.2.3.1 设计所要扩增的鸭PPARs基因启动子引物 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 PCR扩增目的片段 | 第29页 |
| 2.2.3.3 回收凝胶并纯化PCR产物 | 第29页 |
| 2.2.3.4 回收纯化的目的片段与T载体连接 | 第29-30页 |
| 2.2.3.5 重组质粒转化 | 第30页 |
| 2.2.3.6 阳性克隆及测序鉴定 | 第30页 |
| 2.2.4 鸭PPARs基因启动子的生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 2.2.5 含有鸭PPARs基因启动子的荧光素酶报告基因载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.5.1 启动子5’递减片段的荧光素酶报告基因载体构建引物计 | 第31页 |
| 2.2.5.2 递减片段的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.5.3 PCR产物的纯化和回收及克隆和测序 | 第32页 |
| 2.2.5.4 重组质粒DNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.5.5 重组质粒双酶切和产物纯化回收 | 第32-33页 |
| 2.2.5.6 pGL3-basic与PPARs重组载体构建 | 第33页 |
| 2.2.5.7 重组pGL3-basic-PPARs载体克隆及测序 | 第33页 |
| 2.2.6 鸭PPARs基因启动子核心区域的鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.6.1 无内毒素质粒pGL3-basic-PPARs的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.6.2 HEK293细胞培养 | 第34页 |
| 2.2.6.3 重组质粒瞬时转染 | 第34页 |
| 2.2.6.4 荧光素酶报告基因活性检测 | 第34-35页 |
| 2.2.6.5 数据统计分析 | 第35页 |
| 2.2.7 鸭PPARs基因启动子活性调控元件筛选 | 第35-39页 |
| 2.2.7.1 RNA提取及检测 | 第35页 |
| 2.2.7.2 cDNA合成 | 第35-37页 |
| 2.2.7.3 定量引物设计 | 第37页 |
| 2.2.7.4 qRT-PCR检测 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-59页 |
| 3.1 PPAR基因家族分子进化分析 | 第39-47页 |
| 3.1.1 蛋白质结构域关系 | 第39-41页 |
| 3.1.2 PPAR基因家族的蛋白质进化树 | 第41-42页 |
| 3.1.3 氨基酸位点选择压力分析 | 第42-46页 |
| 3.1.4 5’端启动子区域对应转录因子结合位点 | 第46-47页 |
| 3.2 鸭PPARs基因启动子区扩增 | 第47-52页 |
| 3.2.1 鸭PPARs启动子克隆及同源性比对 | 第47-48页 |
| 3.2.2 鸭PPARs启动子序列特点 | 第48-52页 |
| 3.3 鸭PGL3-BASIc-PPARs重组载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.4 鸭PPARs启动子活性调控区域鉴定 | 第53-56页 |
| 3.4.1 荧光素酶相对活性检测 | 第53-54页 |
| 3.4.2 鸭PPARs基因启动子活性区域比较 | 第54-56页 |
| 3.5 鸭PPARs基因启动子活性调控元件验证 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| 4.1 PPAR基因家族分子进化与调控 | 第59-61页 |
| 4.2 鸭PPARs基因启动子序列特点 | 第61-62页 |
| 4.3 鸭PPARs的活性调控元件异同 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附件 | 第76-82页 |
| 研究生期间发表的文章 | 第82页 |
