| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 常用英文缩写词汇 | 第6-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1. 鸭病毒性肝炎研究进展概况 | 第13-18页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 鸭病毒性肝炎的历史与分布 | 第13-14页 |
| 1.3 鸭肝炎病毒的病原学 | 第14页 |
| 1.4 流行病学 | 第14页 |
| 1.5 临床症状和病理变化 | 第14-15页 |
| 1.6 DHAV分子生物学 | 第15页 |
| 1.7 鸭肝炎病毒的诊断 | 第15-18页 |
| 1.7.1 根据临床症状进行初步诊断 | 第15-16页 |
| 1.7.2 分子生物学诊断 | 第16页 |
| 1.7.3 血清学诊断 | 第16-18页 |
| 2. 单克隆抗体技术 | 第18-19页 |
| 3. 胶体金的研究概况及应用 | 第19-20页 |
| 4. 选题目的和意义 | 第20-21页 |
| 第一章 鸭甲型肝炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定 | 第21-41页 |
| 1. 材料 | 第21-23页 |
| 1.1 细胞、菌株与毒株 | 第21页 |
| 1.2 试验动物 | 第21页 |
| 1.3 试剂、材料 | 第21页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第21-22页 |
| 1.4.1 细胞培养试剂 | 第21-22页 |
| 1.4.2 ELISA相关试剂的配制 | 第22页 |
| 1.4.3 SDS-PAGE电泳相关溶液 | 第22页 |
| 1.5 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2. 试验方法 | 第23-31页 |
| 2.1 DHAV-1单克隆抗体的制备 | 第23-29页 |
| 2.1.1 DHAV-1抗原的制备及纯化 | 第23-24页 |
| 2.1.2 免疫方法 | 第24页 |
| 2.1.3 检测DHAV-1抗体间接ELISA方法的建立 | 第24-25页 |
| 2.1.4 SP2/0小鼠骨髓瘤细胞的培养 | 第25-26页 |
| 2.1.5 饲养层细胞、免疫小鼠脾细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.1.6 细胞融合 | 第27页 |
| 2.1.7 杂交瘤细胞的筛选及亚克隆 | 第27-28页 |
| 2.1.8 杂交瘤细胞的传代、冻存及复苏 | 第28页 |
| 2.1.9 单克隆抗体的大量制备 | 第28页 |
| 2.1.10 单克隆抗体的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2 单克隆抗体特性鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.1 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第29页 |
| 2.2.2 单克隆抗体特异性鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.3 杂交瘤细胞稳定性测定 | 第30页 |
| 2.2.4 各株单抗ELISA效价测定 | 第30页 |
| 2.2.5 单抗识别抗原位点的相加试验分析 | 第30-31页 |
| 2.2.6 单抗亲和常数的测定 | 第31页 |
| 3. 结果 | 第31-39页 |
| 3.1 基于DHAV-1全病毒的间接ELISA方法的构建 | 第31-34页 |
| 3.1.1 最佳抗原包被浓度和血清稀释度的条件优化 | 第31-32页 |
| 3.1.2 最佳酶标抗体浓度 | 第32页 |
| 3.1.3 最佳封闭液、封闭时间的优化 | 第32页 |
| 3.1.4 包被条件的确定 | 第32-33页 |
| 3.1.5 显色时间的确定 | 第33页 |
| 3.1.6 血清孵育时间的确定 | 第33页 |
| 3.1.7 二抗孵育时间的确定 | 第33-34页 |
| 3.1.8 临界值的确定 | 第34页 |
| 3.2 脾细胞、饲养细胞及SP2/0细胞 | 第34-35页 |
| 3.3 细胞融合 | 第35页 |
| 3.4 腹水单抗的制备和纯化 | 第35-36页 |
| 3.5 抗体亚类鉴定 | 第36页 |
| 3.6 细胞培养上清及腹水效价的测定 | 第36页 |
| 3.7 杂交瘤细胞株的稳定性 | 第36-37页 |
| 3.8 特异性 | 第37-38页 |
| 3.9 单抗亲和常数的测定 | 第38页 |
| 3.10 单抗抗原表位的初步鉴定 | 第38-39页 |
| 4. 讨论 | 第39-41页 |
| 4.1 病毒纯化 | 第39页 |
| 4.2 细胞融合及筛选 | 第39-40页 |
| 4.3 单抗特性 | 第40-41页 |
| 第二章 检测1和3型鸭甲肝病毒胶体金试纸条的研制 | 第41-61页 |
| 1. 材料 | 第41-42页 |
| 1.1 毒株与菌株 | 第41页 |
| 1.2 试剂、材料 | 第41页 |
| 1.3 主要试剂的配置 | 第41页 |
| 1.4 仪器设备 | 第41-42页 |
| 2. 试验方法 | 第42-48页 |
| 2.1 玻璃器皿的清洁 | 第42页 |
| 2.2 胶体金颗粒质量鉴定 | 第42页 |
| 2.2.1 肉眼观测 | 第42页 |
| 2.2.2 紫外扫描鉴定 | 第42页 |
| 2.3 待标记抗体的处理 | 第42页 |
| 2.4 金标单克隆抗体的制备和纯化 | 第42-44页 |
| 2.4.1 最适标记K_2CO_3的量 | 第42-43页 |
| 2.4.2 单克隆抗体最适稳定量 | 第43-44页 |
| 2.4.3 单克隆抗体的胶体金标记 | 第44页 |
| 2.4.4 金标单克隆抗体的纯化 | 第44页 |
| 2.5 试纸条最佳试验条件的优化 | 第44-45页 |
| 2.5.1 纯化的兔抗DHAV-1 IgG的包被浓度的确定 | 第44页 |
| 2.5.2 羊抗鼠IgG的包被浓度的确定 | 第44-45页 |
| 2.5.3 胶体金标记的单克隆抗体的稀释度的确定 | 第45页 |
| 2.5.4 试纸条组成材料的选择 | 第45页 |
| 2.6 胶体金试纸的组装 | 第45-46页 |
| 2.7 检测程序与结果判定 | 第46-47页 |
| 2.7.1 鸭胚尿囊液或者菌体培养液的处理 | 第46页 |
| 2.7.2 样品的处理 | 第46页 |
| 2.7.3 样品检测的结果判定 | 第46-47页 |
| 2.8 胶体金试纸条的检测 | 第47-48页 |
| 2.8.1 胶体金试纸条的灵敏性试验 | 第47页 |
| 2.8.2 胶体金试纸条的特异性试验 | 第47页 |
| 2.8.3 胶体金试纸条的重复性试验 | 第47页 |
| 2.8.4 胶体金试纸条的保存期试验 | 第47页 |
| 2.8.5 临床样品的检测 | 第47-48页 |
| 3. 结果 | 第48-56页 |
| 3.1 胶体金溶液质量鉴定 | 第48页 |
| 3.2 胶体金标记抗DHAV-1单抗复合物的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3 金标抗体的优化 | 第49-50页 |
| 3.3.1 胶体金最佳标记K_2CO_3的量的确定 | 第49页 |
| 3.3.2 胶体金最佳标记蛋白量 | 第49-50页 |
| 3.4 试纸条的优化 | 第50-52页 |
| 3.4.1 C线浓度的优化 | 第50页 |
| 3.4.2 金标抗体浓度的优化 | 第50-51页 |
| 3.4.3 T线浓度优化 | 第51页 |
| 3.4.4 NC膜的选择 | 第51页 |
| 3.4.5 玻璃纤维素膜的选择 | 第51-52页 |
| 3.4.6 样品垫的选择 | 第52页 |
| 3.4.7 NC膜封闭时间的确定 | 第52页 |
| 3.5 胶体金试纸条的检测 | 第52-56页 |
| 3.5.1 重复性 | 第52页 |
| 3.5.2 特异性 | 第52-53页 |
| 3.5.3 稳定性 | 第53-54页 |
| 3.5.4 灵敏度 | 第54-55页 |
| 3.5.5 临床样本的检测 | 第55-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-61页 |
| 4.1 胶体金试纸条的优化 | 第57-58页 |
| 4.1.1 抗体的选择 | 第57页 |
| 4.1.2 NC膜的优化 | 第57-58页 |
| 4.1.3 金标的优化 | 第58页 |
| 4.2 胶体金试纸条性能的检测 | 第58-59页 |
| 4.3 临床样本的检测 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
