| 中文摘要 | 第13-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 缩略词索引 | 第18-19页 |
| 第一章 腓骨肌萎缩症与轴周蛋白periaxin | 第19-39页 |
| 1.1 腓骨肌萎缩症CMT的命名、分类及发病机制 | 第19-26页 |
| 1.1.1 CMT的分类 | 第19-20页 |
| 1.1.2 CMT的分子遗传学 | 第20页 |
| 1.1.3 CMT发病机理的研究 | 第20-26页 |
| 1.1.3.1 异常施旺氏细胞/轴突的相互作用 | 第23页 |
| 1.1.3.2 轴突运输功能的缺陷 | 第23-24页 |
| 1.1.3.3 相关蛋白质合成、修饰、降解及功能发挥障碍 | 第24-25页 |
| 1.1.3.4 其他致病机制 | 第25-26页 |
| 1.2 轴周蛋白(periaxin) | 第26-38页 |
| 1.2.1 Periaxin基因两种剪切体及其保守性 | 第27-28页 |
| 1.2.2 Periaxin蛋白由多个结构域组成 | 第28-32页 |
| 1.2.2.1 N末端PDZ结构域 | 第29-30页 |
| 1.2.2.2 NLS结构域 | 第30-31页 |
| 1.2.2.3 重复序列区域 | 第31-32页 |
| 1.2.2.4 C末端酸性区域 | 第32页 |
| 1.2.3 Periaxin蛋白的亚细胞定位 | 第32-33页 |
| 1.2.4 Periaxin相互作用蛋白网络 | 第33-34页 |
| 1.2.5 Periaxin与CMT 4F亚型 | 第34-36页 |
| 1.2.6 Periaxin与晶状体病变 | 第36-37页 |
| 1.2.7 Periaxin与代谢紊乱 | 第37-38页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第38-39页 |
| 第二章 L-periaxin蛋白的不同结构域在蛋白功能发挥中的作用 | 第39-59页 |
| 2.1 前言 | 第39-40页 |
| 2.2 材料与方法 | 第40-47页 |
| 2.2.1 实验材料及试剂 | 第40-41页 |
| 2.2.2 寡聚核苷酸 | 第41页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第42-47页 |
| 2.2.4.1 L-periaxin不同结构域重组载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.4.2 重叠PCR构建pEGFP-S-periaxin-NLS | 第43-44页 |
| 2.2.4.3 细胞培养和基因转染 | 第44页 |
| 2.2.4.4 免疫荧光及免疫组化 | 第44-45页 |
| 2.2.4.5 L-periaxin以及不同结构域缺失重组载体核质分布的检测 | 第45-46页 |
| 2.2.4.6 流式技术分析转染不同质粒细胞的细胞周期分布 | 第46页 |
| 2.2.4.7 MTT细胞增殖实验分析转染不同质粒细胞的生长速率 | 第46页 |
| 2.2.4.8 结晶紫染色测定转染不同质粒细胞的生长能力 | 第46页 |
| 2.2.4.9 单层细胞划痕实验 | 第46-47页 |
| 2.2.4.10 Scansite磷酸化位点预测 | 第47页 |
| 2.2.4.11 L-periaxin第1439位氨基酸Ser残基编码碱基的定点突变 | 第47页 |
| 2.3 实验结果 | 第47-57页 |
| 2.3.1 L-periaxin在RSC96细胞中存在多样性细胞定位 | 第47-48页 |
| 2.3.2 L-periaxin不同结构域对其施旺氏细胞中定位的影响 | 第48-51页 |
| 2.3.3 L-periaxin及PDZ、NLS结构域缺失突变体对细胞生长的影响 | 第51页 |
| 2.3.4 L-periaxin及PDZ、NLS结构域缺失突变体对细胞周期的影响 | 第51-52页 |
| 2.3.5 PI3K抑制剂LY 294002及Akt抑制剂MK-2206对L-periaxin蛋白定位及蛋白表达的影响 | 第52-54页 |
| 2.3.6 L-periaxin基因过表达及敲除后细胞形态及pAkt的表达 | 第54页 |
| 2.3.7 L-periaxin蛋白Akt磷酸化位点的预测及保守性分析 | 第54-57页 |
| 2.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 L-periaxin蛋白NLS结构域与DRP2互作的精细分析 | 第59-76页 |
| 3.1 前言 | 第59-60页 |
| 3.2 材料与方法 | 第60-66页 |
| 3.2.1 实验材料及试剂 | 第60-62页 |
| 3.2.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 3.2.1.2 主要的酶及生化试剂 | 第60-61页 |
| 3.2.1.3 实验抗体 | 第61页 |
| 3.2.1.4 寡聚核苷酸引物 | 第61-62页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第62-66页 |
| 3.2.2.1 质粒的构建 | 第62-63页 |
| 3.2.2.2 重组蛋白的表达纯化 | 第63-64页 |
| 3.2.2.3 细胞培养及转染 | 第64页 |
| 3.2.2.4 双分子荧光互补及荧光共定位 | 第64页 |
| 3.2.2.5 流式细胞仪分析双分子荧光互补重组载体 | 第64页 |
| 3.2.2.6 免疫共沉淀及Western blot分析 | 第64-65页 |
| 3.2.2.7 GST Pull-down分析 | 第65页 |
| 3.2.2.8 NLS重组蛋白FITC标记及荧光滴定实验 | 第65-66页 |
| 3.3 实验结果 | 第66-73页 |
| 3.3.1 L-periaxin与DRP2蛋白N1-384区域存在相互作用及共定位 | 第66页 |
| 3.3.2 L-periaxin蛋白NLS结构域与DRP2 N1-384区域存在相互作用 | 第66-68页 |
| 3.3.3 DRP2蛋白与L-periaxin-NLS互作区域集中于N180-384区域 | 第68-69页 |
| 3.3.4 双分子荧光互补验证DRP2-N180-384与L-periaxin-NLS的互作 | 第69-71页 |
| 3.3.5 L-periaxin-NLS结构域3段亚结构区域具有不同的生物学功能 | 第71-73页 |
| 3.4 讨论 | 第73-76页 |
| 第四章 L-periaxin-NLS结构域影响DRP2与Zwint-1的结合 | 第76-88页 |
| 4.1 前言 | 第76-77页 |
| 4.2 材料与方法 | 第77-79页 |
| 4.2.1 实验材料、抗体与试剂 | 第77页 |
| 4.2.2 寡聚核苷酸引物 | 第77-78页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第78-79页 |
| 4.2.3.1 pCMV-tag-2B,pETM-3C以及pYN-Zwint-1重组质粒的构建 | 第78页 |
| 4.2.3.2 HeLa细胞培养及细胞周期同步化 | 第78页 |
| 4.2.3.3 GST-DRP2-N1-384、His-Zwint-1、Myc-NLS 的pull down分析 | 第78-79页 |
| 4.2.3.4 流式细胞仪分析 | 第79页 |
| 4.3 实验结果 | 第79-85页 |
| 4.3.1 Zwint-1的结构域分布及保守性分析 | 第79-80页 |
| 4.3.2 Zwint-1与DRP2-N1-384存在相互作用 | 第80-81页 |
| 4.3.3 Zwint-1与DRP2-N1-179、N180-349区域存在直接相互作用 | 第81-82页 |
| 4.3.4 Zwint-1与DRP2-N1-349区域互作的Co-IP及荧光共定位分析 | 第82-83页 |
| 4.3.5 双分子荧光互补验证DRP2-N1-179、180-349与Zwint-1的互作 | 第83-84页 |
| 4.3.6 L-periaxin-NLS影响DRP2与Zwint-1的结合 | 第84-85页 |
| 4.4 讨论 | 第85-88页 |
| 第五章 通路分析揭示信号转导通路与腓骨肌萎缩症关联 | 第88-97页 |
| 5.1 前言 | 第88-89页 |
| 5.2 实验方法 | 第89-90页 |
| 5.2.1 数据的获取和收集 | 第89页 |
| 5.2.2 数据分析 | 第89-90页 |
| 5.2.2.1 GO注释及富集分析 | 第89页 |
| 5.2.2.2 SNP注释及分析 | 第89-90页 |
| 5.2.2.3 通路富集分析 | 第90页 |
| 5.3 实验结论 | 第90-95页 |
| 5.3.1 CMT致病基因数据集的收集和整理 | 第90-93页 |
| 5.3.2 CMT突变基因数据集相关SNP位点的功能注释 | 第93页 |
| 5.3.3 CMT突变基因数据集的基因富集分析 | 第93-95页 |
| 5.4 讨论 | 第95-97页 |
| 第六章 总结与展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-110页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简况及联系方式 | 第112-114页 |
