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日本沼虾精子游离和遗传灭活技术研究及顶体反应相关基因的克隆与表达分析

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
引言第13-26页
 第一节 甲壳类动物雌核发育的研究进展第13-23页
  1 雌核发育分类第13-14页
   ·天然雌核发育第13页
   ·人工诱导雌核发育第13-14页
  2 雌核发育技术第14-16页
   ·精子遗传物质的灭活第14-15页
   ·卵细胞染色体的二倍化第15-16页
  3 雌核发育二倍体鉴别第16-17页
  4 雌核发育后代的生长和发育第17-18页
  5 雌核发育研究的应用第18-19页
  6 动物性别决定机制概述第19-20页
   ·遗传性别决定型(GSD)第19-20页
     ·XY型与XO型第19-20页
     ·ZW型与ZO型第20页
     ·单二倍体性决定型第20页
   ·环境性别决定型(ESD)第20页
  7 甲壳动物性别决定研究第20-23页
   ·甲壳动物性染色体的研究第21页
   ·甲壳动物性别决定相关因素第21-23页
     ·促胸腺对甲壳类动物性别决定的影响第21-22页
     ·环境对性别决定的影响第22-23页
 第二节 动物精子受精功能相关基因研究进展第23-24页
  1 精子运动能力及获能相关基因第23页
  2 精子顶体反应相关基因第23-24页
  3 精子穿入透明带相关基因第24页
  4 精卵融合相关基因第24页
 第三节 本研究的目的和意义第24-26页
第一章 酶解制备游离青虾精子方法的研究第26-32页
 1 实验材料第26-27页
   ·实验虾第26-27页
   ·试剂第27页
   ·仪器第27页
 2 试验方法第27-28页
   ·精荚采集第27页
     ·雄虾的饲养第27页
     ·电脉冲刺激第27页
   ·酶解精荚与精子染色观察第27-28页
 3 结果与分析第28-30页
   ·正交试验第28-29页
   ·台盼蓝染色观察第29页
   ·优化验证实验第29-30页
 4 讨论第30-32页
第二章X射线灭活青虾精子的研究第32-39页
 1 实验材料第32-33页
   ·实验虾第32页
   ·试剂第32页
   ·仪器第32-33页
 2 试验方法第33-35页
   ·雌、雄虾的饲养第33页
     ·雄虾的饲养第33页
     ·雌虾的饲养第33页
   ·X射线照射活体雄性青虾第33页
   ·雌雄交配产卵第33页
   ·卵的发育第33-34页
   ·彗星实验第34-35页
     ·制片第34页
     ·裂解第34页
     ·解旋、电泳和中和第34-35页
     ·染色、镜检及数据分析第35页
 3 结果与分析第35-37页
   ·抱卵天数第35页
   ·卵的畸形率第35-36页
   ·彗星实验第36-37页
 4 讨论第37-39页
第三章 青虾丝氨酸蛋白酶Mn SP基因的克隆与表达分析第39-51页
 1 实验材料第39-40页
   ·实验虾第39页
   ·试剂第39-40页
   ·仪器第40页
 2 实验方法第40-46页
   ·试验用品的预处理第40页
   ·青虾总RNA的提取第40页
   ·青虾总RNA浓度及质量检测第40-41页
   ·总RNA第一链c DNA的合成第41页
   ·青虾Mn SP基因中间片段的获得与验证第41-42页
   ·PCR产物的克隆测序第42-43页
     ·PCR扩增产物纯化回收第42页
     ·载体连接第42-43页
     ·产物转化及阳性克隆筛选第43页
   ·青虾Mn SP基因c DNA全序列的获得第43-45页
     ·青虾Mn SP基因的 3′ RACE第43-44页
     ·青虾Mn SP基因的 5′ RACE第44-45页
   ·生物信息学分析第45页
   ·青虾Mn SP基因不同组织表达和时空表达的实时荧光定量PCR第45-46页
     ·引物设计与检验第45-46页
     ·实时荧光定量PCR反应第46页
     ·实时荧光定量PCR分析第46页
 3 结果与分析第46-49页
   ·青虾各个样品提取的总RNA质量及浓度检测第46页
   ·青虾Mn SP基因全长c DNA序列结构特征分析第46-48页
   ·荧光定量PCR结果分析第48-49页
     ·青虾Mn SP基因在成体不同组织中的表达第48-49页
     ·青虾Mn SP基因在胚胎期、出膜幼体及变态后发育不同时期中的表达第49页
 4 讨论第49-51页
全文结论第51-52页
参考文献第52-60页
附录 实验试剂与配置第60-62页
致谢第62-64页
已发表或已接收的文章第64页

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