| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 第一章 microRNA和体细胞核移植 | 第13-22页 |
| ·microRNA与体细胞核移植胚胎早期发育 | 第13-16页 |
| ·体细胞核移植重编程 | 第13-14页 |
| ·microRNA在胚胎早期发育中的研究进展 | 第14-16页 |
| ·microRNA 101与体细胞核移植胚胎发育 | 第16-18页 |
| ·microRNA-101的研究进展 | 第16-17页 |
| ·mi R-101与早期胚胎发育 | 第17-18页 |
| ·ING3与体细胞核移植胚胎 | 第18-21页 |
| ·ING3的研究进展 | 第18-20页 |
| ·ING3对早期胚胎发育的影响 | 第20-21页 |
| ·目的意义 | 第21-22页 |
| 实验部分 | 第22-57页 |
| 第二章 牛miR-101靶基因的验证 | 第22-40页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·质粒、菌株与细胞株 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22-23页 |
| ·溶液配制 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-33页 |
| ·细胞培养 | 第23页 |
| ·模板的提取 | 第23-24页 |
| ·mi R101PCDH513B1过表达载体和预测靶基因报告载体构建 | 第24-27页 |
| ·构建靶基因MUT-PsiCHECKTM-2 报告载体 | 第27-28页 |
| ·细胞培养与转染 | 第28-29页 |
| ·荧光素酶报告系统分析 | 第29-30页 |
| ·WESTERN BLOT | 第30-33页 |
| ·实验结果 | 第33-38页 |
| ·mi R-101与预测靶基因 3’UTR结合位点预测 | 第33页 |
| ·mi R101PCDH513B1过表达载体和 3’UTR- PsiCHECKTM-2 载体构建 | 第33-36页 |
| ·荧光素酶报告实验 | 第36-38页 |
| ·Western blot检测miR-101对ING3蛋白表达的影响 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·过表达载体与报告载体构建 | 第38页 |
| ·验证mi R-101的直接靶基因 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第三章 牛miR-101和靶基因在牛成纤维细胞功能的研究 | 第40-49页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·质粒和细胞 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·仪器设备 | 第40-41页 |
| ·溶液配制 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·细胞的解冻与培养 | 第41页 |
| ·细胞电转染 | 第41页 |
| ·细胞筛选 | 第41-42页 |
| ·阳性细胞中mi R-101过表达检测 | 第42-43页 |
| ·mi R-101对靶基因及相关基因转录水平的影响 | 第43页 |
| ·CCK-8 检测筛选细胞的增殖曲线 | 第43-44页 |
| ·流式检测筛选细胞的凋亡与周期 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-47页 |
| ·阳性细胞的筛选 | 第44-45页 |
| ·mi R101513-B1过表达效率的检测 | 第45页 |
| ·mi R-101对靶基因及相关基因转录水平的影响 | 第45-46页 |
| ·牛成纤维细胞增殖曲线测定 | 第46页 |
| ·流式检测细胞周期与凋亡 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·mi R-101过表达效率检测 | 第47-48页 |
| ·mi R-101靶基因及相关基因mRNA水平表达量检测 | 第48页 |
| ·mi R-101对细胞增殖的影响 | 第48页 |
| ·mi R-101对细胞周期与凋亡的影响 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 miR-101对体细胞核移植胚胎发育的影响 | 第49-57页 |
| ·实验材料 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·仪器 | 第49页 |
| ·溶液配制 | 第49-51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·卵母细胞的采集与体外成熟 | 第51页 |
| ·体细胞核移植 | 第51-52页 |
| ·囊胚的凋亡染色 | 第52页 |
| ·胚胎发育相关基因mRNA水平的表达 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-55页 |
| ·mi R-101对体细胞核移植胚胎发育率的影响 | 第53页 |
| ·mi R-101对体细胞核移植胚胎质量的影响 | 第53-54页 |
| ·mi R-101对核移植胚胎发育相关基因表达的影响 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·mi R-101对体细胞核移植胚胎发育的影响 | 第55页 |
| ·mi R-101对体细胞核移植胚胎质量的影响 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 创新点和后续研究 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
