| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-21页 |
| ·生物柴油的发展 | 第13-14页 |
| ·微藻概述 | 第14-17页 |
| ·藻的脂肪酸组成 | 第15-16页 |
| ·甘油三酯合成 | 第16-17页 |
| ·甘油三酯积聚的生理作用 | 第17页 |
| ·三角褐指藻 | 第17-19页 |
| ·三角褐指藻的基本特质 | 第17-18页 |
| ·三角褐指藻基因工程的研究 | 第18页 |
| ·三角褐指藻基因转化方法的研究 | 第18-19页 |
| ·溶血磷脂酸酰基转移酶 | 第19-21页 |
| ·溶血磷脂酸酰基转移酶简介 | 第19页 |
| ·溶血磷脂酸酰基转移酶的研究现状 | 第19-21页 |
| 第2章 载体的构建 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·实验藻株、菌体和质粒 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·试剂配制 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-28页 |
| ·三角褐指藻总DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·LPAAT基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·LPAAT基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·pMD18-LPAAT重组质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·pMD18-LPAAT与pfcp A-MCS /fcpB-Bar双酶切 | 第26页 |
| ·pMD18-LPAAT与pfcp A-MCS /fcpB-Bar质粒酶切产物的胶回收 | 第26-27页 |
| ·酶切产物的连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及连接产物的转化 | 第27页 |
| ·过表达载体和反义表达载体的鉴定 | 第27-28页 |
| ·过表达载体和反义表达载体的保种和测序 | 第28页 |
| ·实验结果 | 第28-30页 |
| ·三角褐指藻总基因组的提取 | 第28页 |
| ·三角褐指藻LPAAT基因PCR结果分析 | 第28-29页 |
| ·三角褐指藻LPAAT基因和质粒双酶切结果分析 | 第29-30页 |
| ·三角褐指藻LPAAT基因PCR鉴定 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第3章 三角褐指藻基因枪转化 | 第31-39页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·实验藻株、菌体 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·实验仪器 | 第31-32页 |
| ·试剂配制 | 第32页 |
| ·三角褐指藻培养条件 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·金粉准备 | 第32-33页 |
| ·质粒的提取 | 第33页 |
| ·目的基因包被 | 第33-34页 |
| ·轰击前准备 | 第34页 |
| ·轰击步骤 | 第34-35页 |
| ·转化子的验证 | 第35-36页 |
| ·转化子DNA的提取 | 第35页 |
| ·PCR扩增bar基因 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-38页 |
| ·三角褐指藻转化子 | 第36-37页 |
| ·RNA提取结果 | 第37页 |
| ·荧光定量筛选转化子结果 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第4章 转基因藻脂肪酸含量和组分的分析 | 第39-53页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·实验藻株 | 第39页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·三角褐指藻和转基因藻生长曲线绘制 | 第39页 |
| ·脂肪酸标准曲线的绘制 | 第39-40页 |
| ·脂肪酸含量GC-MS检测 | 第40页 |
| ·脂肪酸的甲酯化 | 第40页 |
| ·激光共聚焦检测脂肪酸含量 | 第40-41页 |
| ·统计学分析 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-50页 |
| ·三角褐指藻生长曲线 | 第41-42页 |
| ·转基因藻脂肪酸含量检测方法的建立 | 第42-45页 |
| ·转基因藻在各时期脂肪酸含量及组分的分析 | 第45-49页 |
| ·脂肪酸荧光值分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第5章LPAAT基因转录水平的研究 | 第53-60页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·实验藻株 | 第53页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·三角褐指藻藻总RNA的提取 | 第53-54页 |
| ·三角褐指藻基因组DNA的去除反应 | 第54页 |
| ·三角褐指藻RNA的反转 | 第54页 |
| ·目的基因的荧光定量PCR检测 | 第54-56页 |
| ·实验结果 | 第56-58页 |
| ·LPAAT基因的相对表达量 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第6章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 附录 英文缩写对照表 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |