| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-21页 |
| ·抗菌肽的概述 | 第10页 |
| ·抗菌肽的分类 | 第10-12页 |
| ·根据合成方式分类 | 第10-11页 |
| ·根据来源分类 | 第11页 |
| ·根据结构分类 | 第11-12页 |
| ·抗菌肽的生物学活性 | 第12-14页 |
| ·抗菌肽对细菌的杀伤作用 | 第12页 |
| ·抗菌肽对真菌的杀伤作用 | 第12-13页 |
| ·抗菌肽对病毒的杀伤作用 | 第13页 |
| ·抗菌肽对原虫的杀伤作用 | 第13-14页 |
| ·抗菌肽对肿瘤细胞的杀伤作用 | 第14页 |
| ·抗菌肽的免疫调节作用 | 第14页 |
| ·抗菌肽的作用机制 | 第14-16页 |
| ·膜结构破坏模式 | 第14-15页 |
| ·非膜结构破坏模式 | 第15-16页 |
| ·抗菌肽的分子设计与改良 | 第16-18页 |
| ·以天然抗菌肽为模板设计合成类似物 | 第16-17页 |
| ·氨基酸残基的移动、替换 | 第17页 |
| ·杂合肽的设计 | 第17页 |
| ·其他分子设计方法 | 第17-18页 |
| ·抗菌肽的应用 | 第18-19页 |
| ·抗菌肽在医药方面的应用 | 第18页 |
| ·抗菌肽在禽畜业中的应用 | 第18-19页 |
| ·抗菌肽在防腐中的应用 | 第19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第19-20页 |
| ·本试验的试验内容及研究意义 | 第20-21页 |
| 第2章 抗菌肽MET基因的克隆和真核表达载体的构建 | 第21-32页 |
| ·试验材料 | 第21-23页 |
| ·试验用菌株及载体 | 第21页 |
| ·主要酶、试剂及试剂盒 | 第21页 |
| ·试验仪器 | 第21-22页 |
| ·主要培养基及试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·试验方法 | 第23-29页 |
| ·抗菌肽MET的基因设计与合成 | 第23页 |
| ·抗菌肽MET的PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR产物的电泳检测 | 第24-25页 |
| ·目的片段的胶回收 | 第25页 |
| ·真核表达载体pPICZa-A质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·真核表达载体和目的基因的酶切及连接 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27-29页 |
| ·重组质粒的筛选、鉴定 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-30页 |
| ·抗菌肽MET基因的PCR结果 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第3章 抗菌肽MET的真核表达及纯化 | 第32-49页 |
| ·试验材料 | 第32-35页 |
| ·菌种和引物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·培养基及化学试剂的配制 | 第32-35页 |
| ·试验方法 | 第35-42页 |
| ·大量提取重组质粒pPICZa A-Met | 第35-36页 |
| ·毕赤酵母P.pastoris GS-115感受态的制备 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pPICZa A-Met的线性化 | 第37页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第37-38页 |
| ·PCR鉴定酵母重组子、筛选阳性菌落 | 第38-39页 |
| ·酵母重组子的诱导表达 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·抗菌肽MET的抗菌活性检测 | 第40-41页 |
| ·抗菌肽MET的含量测定和镍柱纯化 | 第41-42页 |
| ·结果和分析 | 第42-47页 |
| ·酵母重组子的PCR鉴定 | 第42-44页 |
| ·酵母重组子的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·抗菌肽MET的抑菌活性测定 | 第45-46页 |
| ·发酵液中粗蛋白含量的测定 | 第46页 |
| ·蛋白质的镍柱纯化 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第4章 抗菌肽MET与抗生素的联合药效 | 第49-58页 |
| ·试验材料 | 第49-50页 |
| ·抗菌肽和试验菌株 | 第49页 |
| ·试剂和材料 | 第49页 |
| ·仪器设备 | 第49-50页 |
| ·试验方法 | 第50页 |
| ·最小抑菌浓度测定 | 第50页 |
| ·抗菌肽MET与抗生素协同作用检测 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-56页 |
| ·抗菌肽MET和抗生素标品MIC的测定 | 第50-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第5章 结论 | 第58-59页 |
| ·抗菌肽MET的载体构建及真核表达纯化 | 第58页 |
| ·抗菌肽MET与抗生素的联合药效 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 缩略语词汇表 | 第65-66页 |
| 附录A 氨基酸及缩写 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第68页 |