无外源L-脯氨酸产反式-4-羟脯氨酸大肠杆菌的构建及发酵优化

摘要	第1-4页
Abstract	第4-8页
第一章 绪论	第8-14页
·反式4羟脯氨酸概述	第8-9页
·反式4羟脯氨酸的应用	第8页
·反式4羟脯氨酸的生产方法	第8-9页
·谷氨酸激酶简介	第9-10页
·外源基因的表达	第10-12页
·宿主与载体的选择	第10-11页
·启动子的选择	第11页
·多基因共表达策略	第11-12页
·国内外研究现状	第12页
·本课题的研究意义和研究内容	第12-14页
·研究意义	第12-13页
·研究内容	第13-14页
第二章 材料与方法	第14-27页
·材料	第14-16页
·菌种和质粒	第14页
·主要试剂	第14页
·主要仪器设备	第14-15页
·培养基	第15页
·主要溶液	第15-16页
·高产L-脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测方法	第16-21页
·大肠杆菌BL21(DE3)基因组的提取	第16-17页
·PCR引物设计	第17页
·质粒的提取	第17页
·扩增proBA的PCR反应体系及反应条件	第17-18页
·PCR产物的纯化	第18页
·大肠杆菌感受态细胞的制备	第18页
·含有proBA重组质粒的构建	第18-19页
·大肠杆菌感受态细胞的转化方法(热激法)	第19页
·酶切鉴定阳性重组质粒	第19页
·DNA测序鉴定重组质粒	第19页
·全质粒PCR定点突变方法	第19页
·全质粒PCR产物转化大肠杆菌的方法	第19-20页
·DNA测序鉴定点突变重组质粒	第20页
·在重组质粒上插入色氨酸串联启动子的方法	第20页
·SDS-PAGE检测谷氨酸激酶的表达	第20-21页
·重组菌L-脯氨酸积累量的检测方法	第21页
·产反式4羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测方法	第21-25页
·含脯氨酸 4-羟化酶基因质粒的提取	第21页
·共表达载体的构建	第21-23页
·大肠杆菌感受态细胞的制备	第23页
·大肠杆菌感受态细胞的热激转化方法	第23页
·酶切鉴定阳性重组质粒	第23-24页
·DNA测序鉴定重组质粒	第24页
·SDS-PAGE检测脯氨酸 4-羟化酶的表达	第24页
·重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定	第24-25页
·反式4羟脯氨酸生产菌株的摇瓶发酵条件优化方法	第25-27页
·重组大肠杆菌生长曲线的绘制	第25页
·重组大肠杆菌发酵曲线的绘制	第25页
·单因素优化方法	第25-26页
·正交实验方法	第26页
·优化后重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定	第26-27页
第三章 结果与讨论	第27-44页
·高产L-脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测	第27-31页
·大肠杆菌BL21(DE3)基因组的提取	第27页
·proBA基因片段的获得	第27-28页
·含有野生型目的基因proBA的重组质粒的构建	第28-29页
·DNA测序鉴定点突变重组质粒	第29页
·在重组质粒上插入色氨酸串联启动子	第29-30页
·SDS-PAGE结果分析	第30-31页
·重组菌L-脯氨酸积累量的检测	第31页
·产反式4羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及检测	第31-36页
·共表达载体的构建及验证	第31-34页
·DNA测序鉴定重组质粒	第34页
·SDS-PAGE结果分析	第34-35页
·重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定	第35-36页
·产反式4羟脯氨酸重组大肠杆菌的摇瓶发酵条件优化	第36-44页
·重组大肠杆菌生长曲线的绘制	第36-37页
·重组大肠杆菌发酵曲线的绘制	第37-38页
·单因素优化	第38-42页
·正交实验结果	第42页
·优化后重组菌反式4羟脯氨酸积累量的测定	第42-44页
主要结论与展望	第44-45页
主要结论	第44页
展望	第44-45页
致谢	第45-46页
参考文献	第46-49页
附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文	第49页